微流控细胞学应用要点.ppt

* 细胞是生物体最基本的结构单元和功能单元,细胞的研究是生命科学研究的基础,对人类的发展具有重大的意义。 对细胞的形态、繁殖与分化、衰老与凋亡、迁移、细胞间的信息传递、细胞的分泌排泄等生命活动的研究有助于探索生命活动的规律与本质、疾病的诊断与治疗。 * 实验中使用的是形微流控芯片,它带有五个不同尺寸的反应室,芯片微通道的 设计以及尺寸如图一所示。反应室的宽度以林递增的方式从林逐渐增加 至,五个反应室的长度均为。图中所示的反应室的末端带有两个对称的圆 锥形是为了减少液体的死体积以及液体在拐弯处的滞留【””。微流控芯片的两个进样 口是为了让细胞悬液和免疫磁珠从两个进样口分别进入,这样的设计能避免样品的交 叉污染 * 首先将英一寸的硅片放入溶液 煮微沸分钟,待冷却后取出用去离子水冲洗至中性,丙酮超声洗涤分钟后在加热板上下加热分钊,。待硅片冷却后,在其表面涂布光刻胶一,使用 的转速旋转分钟可以得到士协厚度的光刻胶。使用紫外曝光机将高 分辨透明掩膜上印刷有微通道的图形曝光到光刻胶上,然后在烘箱中“下烘烤 分钟,未曝光的光刻胶用显影液洗掉。然后用硅烷化试剂三氯,,,一过氟杂 辛基硅烷对光刻胶表面进行小时的硅烷化处理,以减弱模板与之间的结 合力。然后将质量比为的预聚物和固化剂的混合物混合均匀,将混合物 倾倒在光刻胶模板上,并在干燥器中抽真空除去其中的气泡,随后放入烘箱中在 下加热小时,使充分固化。固化好的层直接从模板上取下,并使用 打孔器在层上需要的位置打孔形成进样口和出口。最后将层不可逆的 键合到载玻片上,使用的是氧等离子体键合技术,通过等离子体清洗仪一, ,,,处理和玻璃表面,能够改变其表面性质从 而在二者之间形成化学键作用,处理时间为秒 * 首先将英一寸的硅片放入溶液 煮微沸分钟,待冷却后取出用去离子水冲洗至中性,丙酮超声洗涤分钟后在加热板上下加热分钊,。待硅片冷却后,在其表面涂布光刻胶一,使用 的转速旋转分钟可以得到士协厚度的光刻胶。使用紫外曝光机将高 分辨透明掩膜上印刷有微通道的图形曝光到光刻胶上,然后在烘箱中“下烘烤 分钟,未曝光的光刻胶用显影液洗掉。然后用硅烷化试剂三氯,,,一过氟杂 辛基硅烷对光刻胶表面进行小时的硅烷化处理,以减弱模板与之间的结 合力。然后将质量比为的预聚物和固化剂的混合物混合均匀,将混合物 倾倒在光刻胶模板上,并在干燥器中抽真空除去其中的气泡,随后放入烘箱中在 下加热小时,使充分固化。固化好的层直接从模板上取下,并使用 打孔器在层上需要的位置打孔形成进样口和出口。最后将层不可逆的 键合到载玻片上,使用的是氧等离子体键合技术,通过等离子体清洗仪一, ,,,处理和玻璃表面,能够改变其表面性质从 而在二者之间形成化学键作用,处理时间为秒 * 磁珠通入到微通道中,并在外加磁场的作 用下将免疫磁珠捕获。将淋巴细胞从样品进样口通入到微通道中,然后从另一个进样口通 入对微通道进行冲洗。移去磁铁,用装备有照相机的倒置显微镜对捕获的细胞进 行拍照。 * 磁珠通入到微通道中,并在外加磁场的作 用下将免疫磁珠捕获。将淋巴细胞从样品进样口通入到微通道中,然后从另一个进样口通 入对微通道进行冲洗。移去磁铁,用装备有照相机的倒置显微镜对捕获的细胞进 行拍照。 * 在本工作中,我们利用光引发聚合的方式在微流控芯片的微通道中加工 水凝胶微结构,并将细胞包裹在其中用于抗癌药物的筛选分析。微通道的水凝胶加工 过程只需要普通的荧光显微镜即可完成,其结构形貌和位置均简单可控,并且不需要 掩膜。 * 图一利用光引发聚合在微通道中加工包裹有细胞的水凝胶微结构,并将其应用于抗癌药筛选分 析的示意图。将含有细胞的水凝胶预聚物注射到微通道中。使用荧光显微镜进行原位 紫外光照聚合的方法形成包裹有细胞的水凝胶微阵列。用将未反应的水凝胶预聚物冲 洗干净。将药物通入微通道中与水凝胶中包裹的细胞进行孵育。 * * 汇报人： 李军 时 间： 2016.11.01 微流控芯片上基于免疫磁珠细胞分选及基于水凝胶微阵列药物作用分析 目 录 一、研究背景 二、基于免疫磁珠细胞分选 三、基于水凝胶微阵列药物作用分析 四、结果与讨论 常规的细胞研究方法存在以下几个难点： 细胞的尺寸微小,难于操纵 细胞内成份复杂且含量微小,并包含有大量的生物学信息,需要高通量的分析和高灵敏度的检测手段 传统的细胞培养方法无法提供复杂、微尺度的生长环境。 一、研究背景 微流控芯片细胞学研究优点： 通道尺寸（10~100微米）与单个细胞直径（10~20微米）相近，便与操控 多维网络结构更接近生理状态下细胞的生存环境 可满足高通量细