尼美舒利对大鼠HSC-T6细胞Rassf1基因表达的影响.pdfVIP

尼美舒利对大鼠肝星状细胞Rassf1 基因表达的影响 研究生：彭 芳 导 师：阳学风 教授 中文摘要 目的 探讨Rassf1 基因在HSC-T6 细胞中的表达及尼美舒利对HSC-T6 细胞Rassf1 基因表达的影响。 方法 1.取对数生长期HSC-T6 细胞，接种到含有10%小牛血清RPMI-1640 培养基 中，放入37℃、5 ％CO2 培养箱中培养6-8 小时后，分别加入200µmol/L、400µmol/L 尼美舒利及单纯的RPMI-1640 培养液。每组设3 个平行复孔。 2. 培养第24h 、48h 、72h 后,MTT 比色法检测细胞活力； 3. 培养第48h 采用免疫细胞化学法检测HSC-T6 COX-2 的表达; 4. AnnexinV-APC/7AAD 的流式细胞术检测HSC-T6 的凋亡； 5. 采用实时荧光定量PCR 检测Rassf1mRNA 的表达。 结果 1.免疫细胞化学法检测结果显示，加药后48h 三组细胞环氧合酶-2 表达阳性 率分别为：70.13±2.40 ％、40.13±4.40 ％、30.36±5.81% （F=72.982 ，P ＜0.01 ）； 2.MTT 结果显示，400µmol/L 尼美舒利处理48h 后，HSC-T6 细胞的生长出 现明显的抑制作用； 3.流式细胞术检测结果显示，加药后48h ，200µmol/L、400µmol/L 尼美舒利 处理组HSC-T6 细胞凋亡率分别是10.23±1.34,25.23±7.7％, 65.87±2.89 ％，与空白 对照组比较，两组差异有显著性（P ＜0.01 ）； 4. RT-qPCR 方法检测各实验组Rassf1mRNA 表达的水平，400µmol/L 尼美舒 利处理48h 后，HSC-T6 细胞Rassf1 明显增加 （P ＜0.01 ）。 2 万方数据 结论 1.尼美舒利对体外培养的HSC-T6 细胞具有抑制增殖、诱导凋亡的作用； 2.尼美舒利可能通过增强HSC-T6 Rassf1 基因的表达抑制细胞增殖、诱导细 胞凋亡。 关键词 环氧合酶-2,尼美舒利，肝星状细胞，Rassf1 基因，细胞增殖，细胞凋亡 3 万方数据 The role of nimesulide on the rassf1 gene expression in rat hepatic stellate cells Abstract Objective To explore the effect of nimesulide on the expression of rassf1 in TSC-6 cells. Methods 1.The logarithmic growth phase HSC-T6 cell were cultured in RPMI-1640 medium containing 10% calf serum, 37 ℃, 5%CO2 incubator. For 6-8 hours, adding 200µmol/L、40