神经母细胞瘤恶性进展相关基因初步筛选及验证.pdfVIP

.149. 第2 期 于萌等.神经母细胞瘤忍性过，嗖相关基因初步筛选及验证 基因表达谱分析以及生物信息学分析，对大样本的 1 忌1 细胞系培养:用含 10%胎牛血清的 DMEM 培 NB 病例进行综合分析，进而对异常染色体组上的 养基、RPMIl 640 培养基对人 NB 细胞系进行培养。 分压为 候选基因进行筛选、鉴定，寻找与 NB 恶性发展密切 培养环境为 37 C， C0 5%的细胞培养箱。 2 相关的新基因，从而揭示调控 NB 病程进展的分子 1.6.2 总 RNA 的提取:异硫氨酸肌.酣.氯仿(acid­ 机制。 guanidine-phenoI-chloroform ,AGPC) 法提取组织总 1 材料与方法 RNAoNB 细胞系总 RNA 纯化方法参照。iagen 公司 随试剂盒提供的操作手册。提取的 NB 组织及细胞 1.1 临床资料 系总 RNA 于-70 c保存。 收集的 NB 样本均由手术或送检而得，日本多 1.6.3 PCR 扩增目的基因:紫外分光光度计进行核 个医疗机构参与临床样本的收集。 236 例 NB 样本 酸定量后，取2 问总RNA 在随机引物和 Super­ 用于比较基因组杂交技术分析，136 例样本用于基 Script 11 逆转录酶的作用下逆转录合成第一条cD­ 因表达谱分析，两组分析病例中分别包含有 112 例 NA 链，完成逆转录反应。以 GAPDH 为内对照，检测 和 70 例散发病例。临床标本根据国际NB 分期系统 目的基因的表达。 PCR 产物经 2% 琼脂糖凝胶电泳 进行分类。 70 例散发病例中临床 I 期 15 例. 11 期 8 (含 0.15 gIL澳化乙键)分离后，用 GDS80∞凝胶成 例，皿期 17 例.N期 25 例， Ns 期 5 例，该样本的表 像分析系统拍照分析。 达分析用于 Kaplan-Meier 生存曲线分析。本样本中 1.7 统计学方法 相对应的 MYCN扩增情况见文献[6]。 以 Kaplan-Meier 曲线和Log-rank 检验做单因素 1.2 细胞株及组织样本 生存分析。利用 SPSS 13.0 统计软件处理数据。 人类 NB 部分细胞株由美同标准生物品收藏中 2 结果 心(ATCC)提供，部分细胞系是经原代培养后筛选所 得。 25 种成人正常组织和 2 种胎儿正常组织的 2.1 236 例 NB 病例的基因组特征分类 RNA 样品购自 Clontech 公司。 本研究中，236 例 NB 病例(包含 112 例原发病 1.3 主要试剂与材料