黄连多糖含量测定及抗氧化活性研究.docVIP

　　黄连多糖含量测定及抗氧化活性研究 作者：吴玉娟 王懿萍 姜延伟，姜怡 【摘要】 　　目的比较3种pH值条件下提取的黄连多糖的含量及抗氧化活性差异。方法采用蒽酮－硫酸法测量黄连多糖的含量。分别测定黄连多糖对·OH，O2-·，DPPH的抗氧化活性。结果黄连药材中多糖含量为：碱提取多糖gt;水提取多糖gt;酸提取多糖。抗氧化研究结果表明，在pH值中性条件下，水提取多糖经木瓜酶与Sevag法除蛋白得到的多糖在抗氧化实验中显示出较好的效果，对·OH的EC50为83.913 μg/ml，对DPPH的EC50为249.856 μg/ml，对O2-·则无明显的抑制作用。结论黄连多糖可作为抗氧化剂，具有较好的清除自由基的作用。 【关键词】 黄连 多糖 含量测定 抗氧化活性 　　Abstract：ObjectiveTo pare the differences of content and antioxidant activity of Coptis chinensis polysaccharides betethod ent shoethod had better effect. EC50 of PSA3 against·OH l，and against DPPH l.But PSA3 had no effect against O2-·.ConclusionCoptis chinensis has free radical scavenging activity and can be used as a antioxidant. 　　Key -1）。 　　1.2 仪器 　　TU1901紫外-可见分光光度计，北京普析；FA1004-53423 电子 天平(0.0001g)，上海精科；TDL-5-A低速大容量离心机，上海安亭；DZF-6030B真空干燥箱，上海齐欣。KL-UP超纯水器，成都优普；PHS-3C型pH计，上海雷磁；JJ-1A60/20。式中C为测得的样品溶液的葡萄糖质量浓度(μg/ml)，D为样品溶液的稀释倍数，V为供试液体积(ml)，为醇沉后得到的多糖的质量(g)。 　　2.3 抗氧化活性研究 　　2.3.1 黄连多糖对·OH的抑制作用 　　原理：采用Fenton体系［3］测定黄连多糖对·OH的抑制作用。·OH由EDTA-Fe-H2O2产生，由于·OH可特异性地使番红花红T褪色，根据褪色程度可以衡量·OH生成量。经波长扫描，反应体系在554 nm处有最大吸收。 　　方法：在具塞试管中依次加入100 μg/ml番红花红T 2 ml，0.2mol/L pH7.4的PBS 2 ml，100 μg/ml供试液2 ml，0.3%H2O2 2 ml，0.15 mmol/L EDTA-Fe2+2 ml，混匀后37℃水浴30 min。抑制率(E)=(A样品-AEmin)/(AEmax-AEmin)，式中Emin为以水代替供试液，Emax为以水代替供试液和EDTA-Fe2+。 　　2.3.2 黄连多糖对 O2-·的抑制作用 　　原理：邻苯三酚在碱性条件下能迅速自氧化，释放出超氧阴离子，生成的中间产物在紫外区有吸收［4］。经波长扫描，在320 nm处有最大吸收。经时间扫描，该反应在4 min后趋于平缓。 　　方法：在具塞试管中依次加入100μg/ml供试液4 ml，0.05 mol/L pH8.2的Tris-HCl 4ml，37℃水浴预热10 min，再加入4 mN－1 mN邻苯三酚－盐酸溶液1 ml，混匀后在37℃水浴中以跑表计时准确反应4 min，立即用6 mol/L HCl 1ml终止反应。抑制率(E) =(AEmax-A样品)/ (AEmax-AEmin),式中Emin为以水代替供试液、Tris-HCl，Emax为以水代替供试液。 　　2.3.3 黄连多糖对DPPH的清除作用 　　原理：DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)是一种带有不配对 电子 的比较稳定的自由基，其N原子上有一个游离电子。DPPH的40%乙醇-水溶液在526 nm处有最大的吸收峰。加入抗氧化剂后，DPPH捕捉一个电子与游离电子配对，在526 nm处的吸收减弱［5，6］。 　　方法：在棕色容量瓶中加入100μg/ml供试液6 ml，60μg/ml DPPH醇溶液4 ml中，混匀后在室温下反应30 min。对DPPH自由基的清除率(E)= (AEmax-A样品)/AEmax，式中Emax为以水代替供试液。 　　 3 结果与结论 　　3.1 结果 　　3.1.1 标准曲线的制备及含量测定 通过蒽酮－硫酸法测得实验结果（见表2），标准曲线方程为Y = 0.006 9X + 0.000 4，r2=0.999 7，线性范