兔肝细胞中与RHDV VP60P2亚区相互作用蛋白质的筛选和初步鉴定.pdfVIP

畜牧兽医学报 2016 ,47(3):549-558 Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica doi: 10. 11843/j. issn. 0366-6964. 2016. 03. 018 兔肝细胞中与 RHDV VP60 P2 亚区相互作用 蛋白质的筛选和初步鉴定 李腾l·2 ，姜平l\ 王芳lJ\ 宋艳华2 ，胡波2 ，范志宇2 ，魏后军2 ，仇汝龙2 ，刘星2 (1.南京农业大学动物医学院，南京 210095;2. 江苏省农业科学院兽医研究所，农业部兽用生物制品 工程技术重点实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014) 摘 要:兔出血症病毒(RHDV) 衣壳蛋白 VP60 P2 亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用，为找寻 RHDV 靶细胞 兔肝细胞中与 P2 亚区相互作用的蛋白质，以原核表达的 P2 蛋白为诱饵蛋白质，通过免疫共沉 淀试验(Co-IP) 结合质谱分析筛选与之有相互作用的肝细胞蛋白质。经分析选取层幸自连蛋白受体(LamR) 蛋白做 进一步研究。提取兔肝细胞总 RNA，反转录扩增 LamR 基因，将其插入 pGEX-6p-1 载体，经 IPTG 诱导表达，获得 GST-LamR 融合蛋白，并通过 GST pull-down 试验验证 LamR 蛋白与 P2 蛋臼的结合。结果显示，以 P2 蛋白为诱 饵蛋白质，免疫共沉淀试验结合质谱分析共筛选到 26 个与 P2 存在相互作用的肝细胞蛋白质，其中 LamR 蛋白是 多种病毒的受体。通过原核表达系统表达了 LamR 蛋白，经 pull-down 试验验证了 LamR 蛋白与 P2 蛋白有直接的 相互作用。本研究证实兔肝细胞 LamR 蛋白与 RHDV VP60 P2 蛋白的相互作用，为深入研究 RHDV 的感染过程、 揭示 RHDV 的致病机制提供了线索。 关键词:兔出血症病毒(RHDV) ;VP60 P2 亚区;免疫共沉淀;层新连蛋白受体(LamR) 中图分类号:S855. 3;S852. 659. 6 文献标志码:A 文章编号: 0366-6964(2016)03-0549-10 Screening and Identification of RHDV VP60 P2 Domain Interacting Proteins in Rabbit Liver Cells 椅 2 LI Teng 1.2. ]lANG Ping1 • WANG F ang I.2 • SONG Yan-hui. HU Bd. FAN Zhi-yu • 2 2 WEI Hou-jun • QIU Ru-loni. LIU Xing (1. Key Laboratory of Animal Diseases Diagnostic and lmmunology. College of Veterinary Medici肘， Nanjing Agricultural University. Nanjing 210095. China; 2. Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology of Ministry of Agriculture. National Center for Engineering Research of Veterinary Bi o-