苹果树腐烂病菌胞外果胶酶分离纯化及其性质.PDFVIP

微生物学通报 Mar. 20, 2017, 44(3): 639−647 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160236 研究报告 苹果树腐烂病菌胞外果胶酶分离纯化及其性质 1 2 2 1 2 1* 冯浩 何媛媛 甄伟 高小宁 王惠 黄丽丽 (1. 712100) (2. 712100) 摘 要：【目的】分离纯化苹果树腐烂病菌的果胶酶，明确其酶学性质。【方法】利用0.5%淀粉 MS 培养基对苹果树腐烂病菌分别进行不同天数发酵，DNS 法定量测定果胶酶活性。通过硫酸铵 梯度盐析、Sephacryl S-100 凝胶过滤层析和阴离子交换层析DEAE-Sepharose Fast Flow 分离纯化 果胶酶，经SDS检测样品纯度，并利用生物化学技术分析其酶学性质。【结果】发酵10 d 的发酵液中果胶酶活性最高；分离得到的果胶酶为鼠李糖半乳糖醛酸酶，分子量为58.83 kD，等 电点为6.03 ，最适反应温度为40 °C ，最适反应pH 为3.5 ，在pH 2.0−5.5 之间酶活性比较稳定。 2+ + 2+ + 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ + Ca 、Li 、Co 对酶活力有激活作用，K 、Fe 、Pb 、Zn 、Cu 、Mn 、Ni 对酶活有抑制作 用，Ba2+ 和 Mg2+ 对酶活性有钝化作用。酶动力学常数 K 和 V 值分别是 3.600 g/L 和 m m 0.162 7 g/(L·min)。【结论】从苹果树腐烂病菌的发酵液中分离得到鼠李糖半乳糖醛酸酶并明确了 其酶学性质，为果胶酶抗体的制备和细胞化学研究奠定基础。 关键词：苹果树腐烂病菌，果胶酶，分离纯化，酶学性质 Isolation, purification and characterization of extracellular pectinase produced by Valsa mali FENG Hao1 HE Yuan-Yuan2 ZHEN Wei2 GAO Xiao-Ning1 WANG Hui2 HUANG Li-Li1* (1. College of Plant Protection, Northwest AF University, Yangling, Shaanxi 712100, China) (2. College of Science, Northwest AF University, Yangling, Shaanxi 712100, China) Abstract: [Objective] The purpose of this study was to separate and purify the pectinase of Valsa mali, and explore the corresponding enzymatic properties. [Methods] V. mali was cultured in MS medium containin