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2017-05-17 发布于北京
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鉴别猪伪狂犬病病毒的双重PCR方法的建立及初步应用.pdf

中国畜牧兽医 2016 ,43(5):1169-1175 China Animal Husbandry Veterinary Medicine doi: 10. 16431/j. cnki. 1671-7236. 2016.05.007 鉴别猪伪狂犬病病毒的双重 PCR 方法的建立及初步应用练斯南1 ， 2 ，梁淋2 ，白挨泉I\ 崔尚金2 提 (1.佛山科学技术学院，佛山 528231;2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193) 摘要:为了检测猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus ,PRV) 的感染情况，并进行强弱毒株的鉴别诊断，本研究建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的鉴别猪 PRV 的双重 PCR 方法。针对 PRV gE 和 gB 基因序列，分别设计了 2 对特异性引物，通过对退火温度(50~60 .C ，按照 1 .C 递增)、引物浓度(0.2~ 1. 4μL，依次增加 O. 2μL)的优化，结果表明，双重 PCR 反应的最佳退火温度为 56.C 、最适引物添加量为 lμL。特异性试验结果表明，该方法可以扩增出 PRV gE(316 bp) 和 gB(432 bp) 的目的片段，对 PCV2 ， PTV、 CSFV、 PPV、 PRRSV、大肠杆菌的 DNA 或 cDNA 3 3 均无扩增。敏感性试验结果表明，PRV gE 和 gB 的最低核酸检出量分别为 4.4X10 3.3X10 L，与单→ 和拷贝 /μ PCR 方法的敏感性相近。应用该方法对广东、广西地区临床送检的 56 份组织样品进行检测，检测结果显示，强毒感染阳性率为 53.6 % (30/56) ，阴性率为 46.4% (26/56) ，未发现有弱毒感染。关键词:猪;伪狂犬病病毒;双重 PCR;检测方法中图分类号:S852.65 文章编号: 1671-7236(2016)05-1169-07 文献标识码:A Establishment and Primary Application of Duplex PCR Assay to Detect Procine Pseudorabies Virus 餐 I