非洲猪瘟病毒高效纳米PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

第 34 卷第 10 期 中国预防兽医学报 Vo l. 34 ,No.10 2012 年 10 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Oct. 2012 doi: 1 0 .3969/j .issn.l 008-0589 .2012.10.12 非洲猪瘟病毒 效纳米 PCR 检测方法的建立及初步应用 崔尚金 l ，胡泉博 l ，刘业兵 2 (1 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 ; 2 中国兽医药品监察所，北京 100081) 摘 要:为将纳米 PCR 技术引入非洲猪瘟病毒(ASFV)检测，本研究建立了 ASFV 的高效纳米 PCR 检测方 法，该方法采用纳米金颗粒作为热导介子，提高了 PCR 反应效率，采用该方法同时检测 ASFV、大肠杆菌、猪伪 狂犬病毒、猪圈环病毒2 型、典型猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪捷中病毒、猪脑心肌炎病毒等，结果 只有 ASFV 能够扩增出 552 bp 的目的片段。敏感性试验表明纳米 PCR 检测技术是常规 PCR 检测技术敏感性的 lOOO 倍以上，最低核酸拷贝数检出量可以达到 10 个拷贝。采用该方法对黑龙江、吉林和河南 3 个省份的 8 个地 区格床送检的 69 份样品进行检测，检测结果显示均为阴性，在以上3 个地区均未发现ASFV 感染情况。 关键词:纳米 PCR; 非洲猪瘟病毒; P54 基因 中图分类号: S852.65 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2012)10-0807-03 The development of nanometer PCR assay for detection of the Africa swine fever virus 2 l CUI Shang才in ， HU Quan-bo , L阳Ye-bing2 (1. Division of Swine Infectious Diseases , State Key Laboratory of Veterinary Biotechno1ogy , Harbin Veterinary Research Institu饨， Chinese Academy of Agricu1tura1 Sciences , Harbin 150001 , China; 2. China Institute of Veterinary Drug Contro1 , Beijing 100081 , China) Abstract: In the present study, a nanometer PCR (nano-PCR) assay was developed to detect the A副ca swine fever virus (ASFV) using the P54 gene containing recombinant plasmid as the tamplate for 552bp fragment amplification. The amplification was efficiently