抗丙型肝炎病毒第一高变区抗体捕获HCV病毒的实验研究_0.docVIP

抗丙型肝炎病毒第一高变区抗体捕获HCV病毒的实验研究 【摘要】 目的 采用抗丙型肝炎病毒（HCV）第一高变区（HVR1）抗体，建立病毒捕获实验。 方法 重组表达HVR1嵌合抗原，免疫家兔，制备抗HVR1抗体，与20例患者阳性血清反应，通过HCV RT-PCR检测捕获结果。结果 在30例样品中有13例完全捕获，16例部分捕获 ，仅1例未捕获。结论 抗HVR1多抗可高交叉捕获HCV病毒。 　　【关键词】 肝炎病毒丙型； 互补决定区抗体； 聚合酶链反应 　　Studies on the antibodies against hypervariable 1(HVR1) of hepatitis C virus (HCV) capture virus 　 　　【Abstract】 Objective A set of test capture virus was formulated. Using antibodies against hypervariable 1(HVR1) of hepatitis C virus (HCV). Methods Recombinant expression antigens of chimeric HVR1, the preparation of antibodies against HVR1 by immuno-rabbit,with 30 cases patients of HCV infection capture test，the results were detected by HCV RT-PCR. Results In 30 cases of HCV infection can capture virus of 13cases completely, 16 cases capture partly,only 1case can not capture. Conclusions The antibodies against hypervariable 1(HVR1) of hepatitis C virus (HCV) can broadly capture virus of HCV. 　　【Key words】 hepatitis C virus; complementarity determining regions antibody; polymerase chain reaction 　　丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的世界性传染病。 研究 表明，约70％～85%的HCV感染将 发展 为慢性肝炎，其中部分最终将发展成为肝硬化和肝细胞癌，是极为严重的世界公共卫生 问题 。而 目前 仍没有有效的 治疗 和预防的方法，问题在于HCV变异大，而中和性表位所在的HVR1区变异更大，变异引起的免疫逃逸，要获得有效的免疫几乎不可能。但最近研究表明，HVR1虽然高变，但仍有一定 规律 性，存在着一定的免疫交叉反应性，又为这方面研究带来一线曙光。于是就出现了有关高交叉反应性HVR1的研究，也取得了可喜的结果。Zibert［1］等证明HVR1-Ab能有效捕获同株病毒粒子，Zhou［2］等证明HVR1-Ab能阻止同株病毒吸附于培养细胞上。本研究用克隆表达的交叉性HVR1作为免疫原，制备抗HVR1抗体，对20份病人血清进行了体外捕获病毒实验，获得了满意的结果。 　　1 材料与方法 　　1.1 融合多片段HVR1抗原及抗HVR1体的制备［3］ 通过用生物信息学手段，从国内外已报道的123条HVR1序列，挑选了12条代表性HVR1序列，通过用酶联免疫对丙 肝患者 血清进行筛选，最终确定4条具有高交叉反应性的优势HVR1串联，克隆表达获得高交叉反应的HVR1抗原。将纯化的HVR1融合蛋白，免疫雄性大耳白家兔，皮下注射1 ml混合有完全弗氏佐剂1mg HVR1融合抗原，21、42天后用混合有不完全弗氏佐剂1mg HVR1再加强1次，51天后，耳静脉取血测效价，达到所需抗体效价要求后，颈总动脉取血。采用ELISA法对免疫动物血清的效价进行测试。 　　1.2 血清样品 30例临床确认的丙型肝炎患者血清。 　　1.3 抗HVR1抗体捕获病毒试验 　　1.3.1 常规捕获病毒试验 HCV RNA阳性血清用PBS 1：50稀释，4离心 16000r/min×15min。取上清50μl,加入免疫兔抗HVR1血清（1mg/ml）5μl，4孵育4 h。加入50μl羊抗兔IgG，4孵育1.5h,4离心2800r/min×15 min 取上清和沉淀分别做RNA检测。 　　1.3.2 样品经预处理后捕获病毒试验 取HCV RNA阳性血清100μl,加样品预处理液50μ