氮源和碳源对冬凌草愈伤组织生长及迷迭香酸的积累的影响.docVIP

氮源和碳源对冬凌草愈伤组织生长及迷迭香酸的积累的影响 作者：李汉伟，苏秀红，董诚明，王伟丽 【摘要】 目的研究碳源、氮源对冬凌草愈伤组织生长及其内迷迭香酸积累的影响。方法改变培养基中蔗糖浓度和碳源种类，考察不同碳源及其浓度对愈伤组织生长和迷迭香酸积累的影响。在总氮源不变的情况下改变NO3-/NH4+的比例，考察不同NO3-/NH4+比例对愈伤组织生长和迷迭香酸积累的影响。结果蔗糖是冬凌草愈伤组织培养中的最佳的碳源，其浓度为3%时，有利于冬凌草愈伤组织的生长和迷迭香酸的积累;NO3-/NH4+比例为11时，愈伤增值倍数最高；NO3-/NH4+比例21时，迷迭香酸的积累量最大。结论实验确定了冬凌草愈伤组织培养的最佳碳源种类、浓度及氮源比例,表明不同碳源、氮源对冬凌草愈伤组织生长和次生代谢物合成有显著影响。 【关键词】 冬凌草； 愈伤组织； 碳源； 氮源； 迷迭香酸 　　Abstract：ObjectiveTo study the effects of carbon, nitrogen on growth and rosmarinic acid accumulation of Rabdosia rubescens (Henmsl.) Hara callus.MethodsThe callus growth and rosmarinic acid accumulation were studied by manipulation of concentration sucrose, carbon and nitrogen. ResultsSucrose was the best for the callus growth and rosmarinic acid accumulation. 30 g/L sucrose was favorable for callus multiplication and rosmarinic acid accumulated. The maximum callus multiplication, content of accumulated rosmarinic acid were achieved while the ratio of NO3- and NH4+was 1∶1， 21，respectively when concentration of total nitrogen source was kept at the same level. ConclusionVarious carbon, nitrogen have significant effects on growth and rosmarinic acid accumulation of Rabdosia rubescens (Henmsl.) Hara callus. The best carbon source and its concentration,nitrogen sources for the growth of Rabdosia rubescens (Henmsl.) Hara callus and the synthesis of secondary metabolite were confirmed. 　　Key words： Rabdosia rubescens (Henmsl.) Hara; callus; Carbon; Nitrogen; Rosmarinic acid 　　冬凌草Rabdosia rubescens (Henmsl.)Hara为唇形科香茶菜属多年生植物,其入药部位是地上部分。近年来许多学者对冬凌草化学成分、药理作用及临床疗效进行了研究，发现其中的主要抗癌、抗菌活性成分为二萜类化合物（冬凌草甲素、冬凌草乙素）和多酚类化合物迷迭香酸，并对其作了较深入的研究［1,2］。国内学者在冬凌草组织培养方面也开展了相关工作［3～5］，但均不够系统和完善，且未对影响其愈伤培养物生长及其内次生代谢产物积累的因素进行研究。迷迭香酸作为冬凌草水溶性部分中主要的有效成分，具有较好的抗菌、消炎、止痛的功效,为此，笔者在本实验室对冬凌草离体培养研究的基础上［6,7］，对影响其愈伤组织生长和代谢产物积累的碳、氮源种类及蔗糖浓度进行了研究，并考察了这些因素对其内主要次生代谢产物－迷迭香酸和冬凌草甲素的影响(因在整个愈伤组织培养过程中未检测到冬凌草甲素,故其积累 规律 在文中未进行探讨)，为进一步提高冬凌草培养物内有效成分产量、优化培养条件提供依据。 　 　1 材料与方法 　　1.1 愈伤组织的获得 　　以冬凌草叶片作为外植体，在MS附加6-BA 2.0 mg/L，NAA 1.0 mg/L的培养基上