第十章转基因植物的检测与鉴定.pptVIP

第九章 转基因植物的检查与鉴定 第九章 转基因植物的检查与鉴定 第一节 报告基因的表达检测 第二节 外源基因整合的Southern杂交鉴定 第三节 外源基因转录的Northern杂交检测 第四节 外源基因表达蛋白的检℃测 报告基因的两大特点： 表达产物及产物的类似功能在未转化的植物细胞内并不存在； 便于检查 目前常使用的报告基因GFP，GUS，BAR，NPTII等 1、gfp（绿色荧光蛋白）基因 简介：绿色荧光蛋白是一些腔肠动物所特有的生物荧光素蛋白。生物荧光素蛋白是指存在于生物体的、能在激发光作用下发射出荧光的蛋白质。它是一种能接受荧光辐射能并最终发射荧光的物质。 从水母中分离纯化的Gfp是由238个氨基酸残基组成的单体蛋白，分子量26888Da，它在蓝光激发下能发出绿光。 Gfp作报告基因的优点： 适用于各种生物的基因转化； 检查方法简便，无需底物、梅、辅因子等物质； 便于活体检测； 检测是可获得直观信息。 2、gus（β-葡萄糖苷酸酶）基因 Gus基因存在于某些细菌体内，是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解。 检测方法：组织化学染色定位法 以X-Gluc为底物，通过显色反应可直接观察到组织器官中gus基因的活性。在适宜的条件下，该酶可将X-Gluc水解成蓝色物质，此靛蓝染料使具有Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或显微镜即可观察。 第二节 外源基因