分子遗传学5DNA损伤修复突变.ppt

一、自发性DNA损伤 　错配（mispairing or mismatch）：DNA在复制或修复合成时，会发生碱基的错配，每次DNA复制时，其错配的发生率估计在10－7~10－11 。 　互变异构现象（tautomerism）：互变异构体：形成酮式－烯醇式或氨基－亚氨基的互变异构体。当C或A以亚氨基形式存在时：发生 A＝C 错配；当 G或T以烯醇式存在时：发生 G＝T错配。 　DNA聚合酶的“打滑” （slippage）:不论是模板链或新生链有时都会发生碱基的“环出”的现象，引起一个或数个碱基的缺失或插入。 滑序复制：是近年来在人类基因组中发现的三核苷酸重复顺序扩张疾病(trinucleotide repeat expansion disease)的重要原因。例如人类亨廷顿氏舞蹈病(Huntington’s disease)基因所含的5’—CAG—3’重复顺序正常数目在10~35次，而患者的同一基因位点中，该重复顺扩，到36－121个，使谷氨酰胺数目增加，产生无功能的蛋白质。 二、环境因素对DNA的损伤 　①DNA－反应性化合物 　化学因素 ②碱基类似物 　（化学诱变剂） ③移码诱变剂 　④代谢活化的化学物质 　　物理因素 电离辐射、紫外线 　生物因素 H2O → H2O＋ ＋ e- (正离子) （自由离子） e- + H2O → H2O- (负离子) ?进一步反应 H2O+ H+ + OHO H2O- → OH- + Ho 自由基能互相反应，并能和其他分子发生反应： HO ＋OHO → H2O HO ＋ HO →H2 OHO ＋OHO →H2O2 H ＋ O2 → HO2 第二节 DNA的修复系统 DNA的修复系统 一、直接（回复）修复： 二、切除修复系统 四、大肠杆菌的挽回系统 Post-replication repair 第三节 基因突变 （gene mutation） 返回 三、错配修复 主要用于对应的DNA链上不互补的碱基，错配是由于在DNA复制中新生链上的碱基与互补链上的碱基不互补产生的。通常错配系统倾向于修复新生链上的碱基。 在E.coli复制中发生错配时，错配的核苷酸只是其碱基不能与母链配对，核苷酸本身的结构是正常的，因此对正确母链和错配子链的区分至关重要： 亲本链上带有甲基 刚合成的子链尚未甲基化 dam 基因→Dam 甲基化靶位点 序列上的A成为6-m-A,此半甲基化位点被用来作为复制中母链的标志，同样用于与复制相关的修复。 E.coli 错配修复系统包括9个蛋白成分，其中有MutS、MutL、与MutH。MutS识别错误配对的碱基并与其结合（MutS二聚体）、MutL和MutH蛋白按顺序加入，并与Muts协同作用。MutH在含有错配碱基的单链上切口，在螺旋酶II作用下解开双螺旋。随后在一种双向性外切酶的作用下依次从切口处切除，直到切除错误的核苷酸。再由DNA pol III 填充空隙，进行修复合成，最后由连接酶连接。由于切口和错配核苷酸相距很远（1~2kb）,故这种修复是一种长片段修复。 GATC CTAG 返回 也称补偿系统、复制后修复（post-replication repair）或重组修复（recombination-repair） 该系统用于DNA复制时模板链上含有损伤的碱基的特定情况——其修复过程与遗传重组过程相似。 例如当DNA复制时TT存在，使损伤位点不能作为模板，复制被迫跳跃过去。DNA pol III接近TT时，停止合成互补链，然后又在更下游的位置开始合成，因此在新生链上留下一段缺口。 两个双链DNA分子之间通过同源重组，缺口由正常的DNA链为模板，进行新一轮的复制。因此，损伤仅存在于原来的双链中，而以后复制产生的DNA分子将不再有损伤的DNA存在。 recA突变几乎完全丧失重组能力和修复能力 RecB蛋白具有在DNA分子之间交换DNA链的功能，同时在重组修复中又有单链交换的功能。 Uvr系统是负责切除