分子生物学课件第六章转录与逆转录.pptVIP

第六章 转录与逆转录 重难点 转录后加工、真原核转录过程、增强子、终止与抗终止、RNA聚合酶（真原核）、转录起始复合物 ㈠转录 一 转录的定义与特点 1.转录的定义：以DNA为模板，在依赖DNA的 RNA聚合酶的催化下，以4种 NTP（ ATP、CTP、GTP和UTP ） 为原料，合成RNA的过程。 2.转录的特点： 转录的不对称性：在RNA的合成中，DNA的两条链 中仅有一条链可作为转录的模 板。且多基因DNA中正负链可 相间排列 转录单向性：RNA5’→3’合成 转录连续性：共线性，RNA与DNA序列一一 对应,RNA链连续合成 有特定起始、终止位点：启动子、终止子 双链DNA转录能力大于单链：RNA聚合酶与双链结合后活性高于单链 不需完全开链：只需部分解链，最后DNA 还是双链 ※几个概念 1.正链：与mRNA序列相同（T→U）的那条DNA链,编 码链（有义链） 负链：根据碱基互补原则指导mRNA合成的 DNA链,模板链（反义链） 2.转录单元：一段从启动子开始至终止子结 束的DNA序列，转录的功能单元 3.启动子：一段位于结构基因5’端上游区的DNA序 列，能活化RNA聚合酶，特异识别模板 4.终止子： 二 转录的过程概述 1.模板识别：原核细胞中： 模板识别阶段主要指RNA聚合酶与启 动子DNA双链相互作用并与之相结合 的过程。 真核细胞中： 需要一些转录调控因子（辅 助蛋白），RNA聚合酶才能识别启动 子并形成转录前起始复合物（PIC）。 ※拼板理论：真核RNA聚合酶、反式元件、顺式元 件相互作用使转录起始 ※RNAPol识别启动子后 先一下合成子链（RNA）上多个核苷酸 当合成的子链核苷酸9个时，可继续复制 当合成的子链核苷酸9个时,因未到RNAPol结合位点 RNAPol结合不稳，易脱落，不继续转录 2.转录起始：RNA链上第一个核苷酸键产 生，不需引物 ※σ因子：原核RNA聚合酶亚基，促进原核 RNA聚合酶ββ’亚基与DNA模板启 动子结合 ρ因子：与终止子作用，终止转录 3.转录延伸：RNA聚合酶释放σ因子，核心酶 沿着模板DNA移动并使新生RNA 链不断伸长的过程。 4.转录终止：当RNA链延伸到终止位点时， RNA停止合成，转录泡瓦解， DNA链复原，新生RNA链和RNA 聚合酶将被释放下来。 ※转录所需的酶与复合物 RNA聚合酶：是转录过程中最关键的酶，主 要以双链DNA为模板，以4种核 苷三磷酸作为活性前体，并以 Mg2+/Mn2+为辅助因子，催化 RNA链的起始、延伸和终止， 它不需要任何引物，催化生成 的产物是与DNA模板链互补的 RNA。 ※原核生物只一种RNA聚合酶，真核生物有三种 ※真原核RNA聚合酶总结 真核RNA聚合酶：RNA聚合酶Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ，对应三种内含子 RNA聚合酶Ⅱ为关键酶（对应hnRNA→mRNA ），需反式因子作用下起作用 n型内含子：RNA聚合酶n对应的内含子 RNA聚合酶Ⅰ--rRNA,对α-鹅膏蕈碱不敏感 RNA聚合酶Ⅱ--hnRNA→mRNA,对α-鹅膏蕈碱 敏感 RNA聚合酶Ⅲ--tRNA,对α-鹅膏蕈碱有种属特异性 原核RNA聚合酶：全酶-（α2ββ’）σ 核心酶- α2ββ’ 活性中心-ββ’ ★σ因子结构：六聚体蛋白、具有NTP酶和解螺旋酶活性，促使新生RNA链从三元转录复合物中解离出来，从而终止转录。 σ因子作用：与启动子-35区识别 作用机理： ※RNA聚合酶与DNA聚合酶的区别： 转录复合物（反