基因工程和蛋白质工程公开课.pptVIP

蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 （3）化学方法人工合成目的基因 DNA合成仪 从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 利用化学方法人工合成 （一）目的基因的获取 三、基因工程的基本操作程序 用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 用_____________ 切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 将切下的目的基因片段插入质粒的切口处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 相同的黏性末端 DNA连接酶 （二）基因表达载体的构建（核心步骤） 三、基因工程的基本步骤 重组载体组成： 三、基因工程的基本步骤 a.目的基因 b.启动子 c.终止子 d.标记基因 （二）基因表达载体的构建（核心步骤） 将目的基因导入受体细胞 将受体细胞进行扩增 （三）将目的基因导入受体细胞 三、基因工程的基本步骤 1.植物细胞： 2.动物细胞： 3.微生物细胞： （受精卵、卵细胞、体细胞） （受精卵或早期 胚胎干细胞） 农杆菌转化法、基因枪法、 花粉管通道法 显微注射法 感受态细胞法 1.将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 （双子叶植物和裸子植物） Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 　 EcoR Ⅰ 黏性末端　　　　 黏性末端 限制性内切酶的作用过程 Sma Ⅰ 平末端　　　平末端 G 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A (1)来源： (2)特点： 一种限切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 并在特定位点准确切割DNA (3)作用部位 磷酸二酯键 主要来自原核生物 二、基因工程的基本工具 1.基因工程的 ——限制性内切酶 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 用同种限制酶切割来源不同的DNA获得的黏性末端是否相同？ 相同 思考 不同的限制酶呢？ 不同 ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 （1）作用: 催化磷酸二酯键形成，连接DNA片段 二、基因工程的基本工具 2.基因工程的 ——DNA连接酶 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 （2）类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 （1）作用: 催化磷酸二酯键形成，连接DNA片段 二、基因工程的工具 2.基因工程的 ——DNA连接酶 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗? G C T T A A G C T T A A （1）运载体种类：质粒、噬菌体、动植物病毒等 二、基因工程的工具 3.基因工程的 ——运载体 质粒：细菌细胞中一种很小的环状DNA分子。裸露的、结构简单、独立于细菌之外，并且有自我复制能力 （１）质粒上会存在某些标记基因，标记基因有什么用途？ （２）要想将某个特定基因与质粒相连，需要用几种限制性内切酶和几种DNA连接酶处理？ 二、基因工程的工具 3.基因工程的 ——运载体 （2）条件： ①能自我复制并在受体细胞中稳定存在 ②具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接 ③具有标记基因，便于进行筛选 ④结构简单，大小适中 小结 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工具 具备的 条件 结构简单,大小适中 能在宿主细胞中自我复制并稳定存在 具一个多个限制酶切位点 具标记基因 质粒、 λ噬菌体衍生物 、动植物病毒 1.科学家