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葡糖杆菌的SYBR Green Ι 荧光定量PCR方法的建立

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2015, Vol.31, No.4 葡糖杆菌的SYBR Green Ι荧光定量PCR 方法的建立 1,2 1,2 2 2 2 2 2 1 李月华 ,周巍 ,杨岚 ,章晶晶 ,王爽 ,刘涛 ,张岩 ,张伟 (1.河北农业大学食品科技学院,河北保定 071000) (2.河北省食品检验研究院,河北省食品安全重点实验室,河北石家庄 050091) 摘要:基于GenBank 提供的葡糖杆菌的 16S rRNA 保守序列设计PCR 引物,利用SYBR Green Ι 荧光定量PCR 技术建立一种快 速灵敏检测酸乳制品中葡糖杆菌的方法。用本研究建立的SYBR Green Ι 荧光PCR 方法对3 株葡糖杆菌以及18 株非葡糖杆菌进行特 异性检测,并用凝胶电泳验证其可靠性,结果显示,本研究所设计的引物具有良好的特异性。对扩增结束后的PCR 产物进行溶解曲 线分析,证实此引物的扩增产物存在引物二聚体,但可通过溶解曲线的出峰时间排除非特异性扩增。利用SYBR Green Ι 荧光定量PCR 2 检测葡糖杆菌建立的标准曲线相关性良好,R =0.9968 ,对葡糖杆菌进行灵敏度检测,最低检出限可达75 CFU/mL。利用该方法可成 功检测出5 份人工污染样品中的葡糖杆菌,研究表明,该方法灵敏度高、操作简便快捷,适用于酸乳制品的定量检测。 关键字:葡糖杆菌;SYBR Green Ι ;实时定量pcr ;检测;酸乳 文章篇号:1673-9078(2015)4-272-276 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.4.044 Establishment of Real-time Fluorescence Quantitative PCR for Gluconobacter using SYBR Green I 1,2 1,2 2 2 2 2 2 LI Yue-hua , ZHOU Wei , YANG Lan , ZHANG Jing-jing , WANG Shuang , LIU Tao , ZHANGYan , 1 ZHANG Wei (1.Agricultural University of Hebei,College of Food Science and Technology, Baoding 071000, China) (2.Hebei Food Inspection and Research Institute, Hebei Food Safety Key Laboratory, Shijiazhuang 050091, China) Abstract: PCR primer was designed according to 16S rRNA conserved sequence of Gluconobacter from the GenBank, and a rapid and sensitive fluorescence quantitative PCR using SYBR Green Ι for Gluconobacter detection in fermented d

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