分子遗传学第2章遗传的物质基础.ppt

RNA病毒，如烟草花叶病毒 （TMV， tobacco mosaic virus)、MS2噬菌体。由病毒基因组及蛋白质外壳组成 类病毒（viroid）：使高等植物产生疾病的有传染性的因子，是很小的环状RNA分子，只由RNA组成。其复制必须由宿主细胞的酶完成，RNA可以作为复制的模板。类病毒通过复制占有宿主细胞中关键的酶，从而影响细胞正常的功能，所以类病毒通常是致病的 1977 F. Sanger 双脱氧测序法 φχ174 的全序列分析 多聚核苷酸链主链是核糖和磷酸，侧链是碱基；由3’，5’磷酸二酯键连接 链的方向：同一个磷酸基的3’ 酯键到5’ 酯键的方向（5’ 3’） 几种不同的DNA双螺旋结构以及同一种双螺旋结构内参数存在差异的现象 A-DNA, B-DNA, C-DNA, D-DNA, Z-DNA…; Z－DNA：左旋双螺旋DNA，在双螺旋多核苷酸链中，只要嘧啶和嘌呤交替排列，在高盐浓度下，可出现Z构象。其脱氧核糖－磷酸骨架按之字形从一端伸向另一端 Z-DNA可能存在于天然DNA的特殊区域（因为天然DNA中的部分区域可以与Z-DNA的抗体结合） LacO 较长的回文结构，可形成茎环 (发夹)结构或十字形结构 较短的回文序列，可作为一种特别信号，如限制性核酸内切酶的识别位点；一些调控蛋白的识别位点 富含A/T的序列 在高等生物中，A+T与G＋C的含量差不多相等 在染色体某一区域，A·T含量可能相当高。如在很多有重要调节功能的DNA区段都富含A·T，特别是在复制起点和启动子的Pribnow框(真核生物为TATA框)的序列中，其对于复制和起始十分重要 A－T对只有二条氢键，此双链较G－C对处易于解开，有利于起始复合物的形成。 核酸定量A260 dsDNA 1OD=50μg/ml ssDNA 1OD=30μg/ml RNA 1OD=40μg/ml 单链寡核苷酸 1OD=33 μg/ml 使用中性或弱碱性溶液而且比色皿的光径为1cm时可以使用上述数值。一个OD值的定义为在260nm波长下，1ml体积水溶液，1cm光程，吸光度为1A 核酸纯度A260/A280 pure dsDNA: 1.8 pure RNA: 2.0 (5) 常用DNA变性方法 热变性 应用广泛，特别适用于变性动力学研究 可能引起磷酸二酯键的断裂，得到长短不一的单链DNA 碱变性 不会造成磷酸二酯键的断裂 在pH＝11.3时，所有氢键被淘汰，DNA完全变性为单链 制备单链DNA时，优先采用碱变性 通常DNA热变性后，将温度缓慢冷却，并维持在比Tm低25～30℃左右时，变性后的单链DNA即可恢复双螺旋结构。复性后的DNA，理化性质都能得到恢复 但DNA热变后快速冷却，则不能复性 2.3.8 PCR(polymerase chain reaction)技术 PCR的基本原理 PCR技术的应用 PCR技术简史 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明 PCR技术简史 核酸体外扩增的设想 聚合酶链反应的发明 Taq DNA聚合酶 早期采用E. coli DNA PolI的Klenow大片段 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的应用 科学研究 基因克隆，DNA测序，分析突变 诊断 细菌、病毒、寄生虫检测，诊断 人类基因组计划 遗传图谱的构建，DNA测序，表达图谱 法医 犯罪现场标本分析 肿瘤 各种肿瘤检测 其他…… 1963 K. Hoogsteen 多聚嘧啶和多聚嘌呤组成的DNA螺旋区段，其序列中有较长的镜像重复时，形成局部三股配对并互相盘绕的三股螺旋 无论何种形式的三螺旋 DNA, 第二股中间 链必须是 Purin链 超螺旋结构（正、负）是DNA三级结构的一种普遍形式 1965 Vinogard等最早在多瘤病毒环形DNA中发现 绝大多数原核生物都是共价闭合环(covalently closed circle,CCC)；真核生物的染色体虽为线形分子，但其DNA与