敲低RACK1基因抑制C2C12细胞中MyoG和MHC基因表达.pdfVIP

生物技术·Animal 20t7年第53裔第3期 Biotechndogy 敲低RA 和MHC基因表达 张晶”，王胜军，刘 妍坩，汪文俊2，刘玉兰 (1，武汉轻工大学，动物营养与饲料科学湖北省重点实验室，湖北武汉430023； 2．中南民族大学，生命科学学院，湖北武汉430074) Western 外，Westem siRNA一2干扰效率最高，转染48 h后，Westernblot和免疫荧 qPCR表明，MHC和MyoG的mRNA表达均显著性下调(PO．05)；诱导分化72 光结果表明MHC和MyoG的蛋白表达明显低于对照组，但AKT和Erk磷酸化水平未见明显变化。上述结果表明， 干扰RACKl能显著抑制MHC和MyoG的表达，提示RACKl正向调控C2C12成肌细胞的分化。 关键词：成肌细胞；激活性蛋白激酶c受体l；肌细胞生成素；肌球蛋白重链；RNA干扰 中图分类号：$814．5 文献标识码：A RACKl(激活性蛋白激酶c受体1)是含7个肌管的形成陋]。在肌分化的过程中，一系列骨骼肌 色氨酸一天冬氨酸(WD40)重复序列结构的蛋白。特异性基因开始表达，肌细胞生成素(myogenin， chain， 它由GNB2LI基因编码，与G蛋白』B亚基显著同源，MyoG)和肌球蛋白重链(Myosinheavy 并在所有真核细胞生物中高度保守ill。RACKI是一 MHC)是其中比较关键的基因。MyoG是骨骼肌分 种多功能支架蛋白，介导多条胞内信号转导，调控 化的决定因子，调控成肌细胞融合和肌纤维形成17-91 细胞增殖、凋亡、迁移、转录和蛋白合成等过程[1-31。MyoG敲除小鼠因无肌肉形成，在出生前后致死”0】 RACKI基因敲除小鼠的原肠胚无法正常形成，揭示MHC是构成骨骼肌纤维内粗肌丝的主要成分。肌 其在胚胎发育中发挥重要作用川。Tang等吲研究发 纤维类型主要由肌纤维内表达的MHC类型来决定 d骨骼肌 【111。 现，RACKl在通城猪和长白猪胚胎期65 中显著差异表达，提示其在骨骼肌发育中发挥作用， 本研究将C2C12成肌细胞作为研究模型，将 但具体功能和调控机制仍然未知。 细胞内源性RACKl用RNAi进行敲低表达，研究 骨骼肌分化是一个复杂的过程，包括成肌细 胞增殖、退出细胞周期、迁移、融合以及最后多核 达的影响，从而揭示RACKl基因表达变化对胚胎 骨骼肌生长发育的影响。 1材料与方法 收收稿日期：2016-04-12；修回日期：2016-05-24 资助项目：湖北省自然科学资助项目(2015CFB514)；湖北省 1．1主要试剂C2C12细胞(小鼠成肌细胞)由华 高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目(T201508) 中农业大学赵书红教授惠赠；胎牛血清、马血清、 作者简介：张晶(1985一)，女，武汉人，博士，讲师，研究方向： 骨骼肌发育和肌肉损伤的机制，E—mail：judyzhan91103@163．corn 2000 mine Transfection +通讯作者 中固亳教缘急