高中生物 专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定课件 新人教版选修1.pptVIP

专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定 DNA的提取是现代生物技术进行中药鉴别的最关键步骤。总DNA的有效提取要求材料中的DNA尽可能少地降解。DNA的质量将直接关系到实验的成败。不同的研究目的对DNA的纯度和量的要求不尽相同。 课题背景 课题1 DNA的粗提取与鉴定 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 课题3 血红蛋白的提取和分离 课题目标 尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。 一、基础知识 1.提取DNA的方法 ②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 （1）DNA的溶解性 ①在不同浓度的NaCl溶液中溶解度 当氯化钠的物质的量浓度为 2mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 问题1.DNA在NaCl溶液中的溶解度如何变化？ 问题2.如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ ③洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 （2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。 ②大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温，而DNA在80 ℃以上才会变性。 2.DNA的鉴定 ①二苯胺染色法 DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色 ②甲基绿染色法 甲基绿与DNA结合，呈绿色 【典型例题】 下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（ ）（多选） A．新鲜猪血、菜花等动植物材料均可用于DNA的粗提取 B．植物材料需先用洗涤剂破坏细胞壁再吸水胀破 C．DNA不溶于95%的冷酒精而溶于2mol/L的NaCl溶液 D．溶有DNA的NaCl溶液中加人二苯胺试剂，需沸水浴加热后冷却，再观察颜色 CD 【方法点拨】 1.新鲜猪血中大量成熟红细胞内无DNA 2.植物材料需先用纤维素酶和果胶酶破坏细胞壁再吸水胀破 3.DNA不溶于95%的冷酒精而溶于2mol/L的NaCl溶液 1.实验材料的选取 二、实验设计 （1）选取原则 材料易得 DNA含量丰富 提取简便 （2）选材鸡血细胞 2.破碎细胞，获取含DNA的滤液 （1)动物细胞 加入蒸馏水，搅拌过滤后收集滤液 （2）植物细胞 加入洗涤剂和食盐，搅拌研磨后过滤收集滤液 3.去除滤液中的杂质 方案一：30mL含DNA的滤液＋2mol/L NaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液 问题1：滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？ 核蛋白、多糖和RNA等杂质 问题2：为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？ 用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中的杂质。 方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白酶）→静置10～15分钟→DNA滤液 方案三：30mL滤液→60～75℃恒温保温10~15分钟→过滤获得DNA滤液 问题3：方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白质，使提取的DNA与蛋白质分开； 方案三是利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性，与DNA分离。 4.DNA的析出与鉴定 （1）析出： 滤液+同体积冷却95%酒精 白色丝状物 （2）溶解： 将白色丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液中 DNA＋二苯胺 蓝色物 （3）鉴定： 沸水5min 【典型例题】 D 【方法点拨】 相关操作 选取的试剂 A 破碎鸡血细胞 蒸馏水 B 溶解核内DNA 2mol/LNaCl溶液 C 提取杂质较少的DNA 冷却的95%的酒精 D DNA的鉴定 双缩脲试剂 下表有关“DNA粗提取和鉴定”的相关操作中所选取的试剂， 错误的是（ ） 1.可以利用DNA在氯化钠溶液中的溶解度不同，将DNA分子溶解或析出 2.DNA不容易酒精，因此可以用95%的冷酒精提取杂质较少的DNA 三、操作提示 3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。 1.以鸡血为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。 2.加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 【课堂小结】