猪细小病毒病.ppt

猪细小病毒病（porcine parvovirus infection，PPI） 又称猪繁殖障碍病，是由猪细小病毒（Porcine parvovirus，PPV）是引起母猪繁殖障碍病。其特征为受感染的母猪，特别是初产母猪流产，产出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔猪。同时PPV还可引起仔猪的皮炎和腹泻。各种类型、 年龄段的猪均可感染 PPV, 但除怀孕母猪和仔猪外, 其他类型的猪感染后均无明显临床症状。 血凝性 PPV能凝集人、猴、豚鼠、小白鼠、鸡和猫等动物的红细胞，其中以豚鼠红细胞最好,鸡红细胞对本病毒的敏感性有很大的个体差异。75 ℃以上加热处理后,病毒的血凝效价几乎完全消失, 弱酸性到中性的介质适于血凝性的保持,病毒感染的细胞培养物对红细胞的吸附作用很弱或没有 细胞培养特性 PPV的繁殖需要依靠宿主细胞的蛋白质和核酸合成系统，能在猪肾细胞、 猪睾丸细胞、PK-15、CPK、IBRS-2 等细胞上生长或繁殖。在多数细胞在处于旺盛的有丝分裂期时进行病毒接种为好,因为这个时期的许多细胞处于细胞繁殖周期 S期( 即 DNA合成期),这时从细胞来的DNA多聚酶有利于病毒复制。新生仔猪原代细胞最适宜 PPV 增殖,培养时需要加入去除生长因子的血清。 PPV的分子生物学研究 基因组 PPV基因组为单股负链DNA,大小约为 5000bp,基因组有两个主要的开放阅读框（ORF），分别编码结构蛋白VP和非结构蛋白NS。 基因组的两端均有发夹结构, PPV的两端是一个回文结构, 5’端有一个 127bp的回文序列, 折叠成 U型结构, 3’ 端有一个102nt的回文序列, 折叠成 Y型结构。基因组两端的这种发夹结构对病毒自身的复制非常重要。PPV DNA 完全依赖于宿主 DNA的复制机制进行自身复制。 结构蛋白与非结构蛋白 PPV基因组3’端ORF编码2种结构蛋白，即VP1和VP2，分子质量分别为84ku和64ku，VP2水解产生另一种结构蛋白VP3，分子质量60ku。结构多肽形成后装配成病毒粒子。VP1的N端有一脯氨酸丰富区(序列为MAPPAKRAKR)在病毒从细胞外转移到细胞内起重要作用，有细胞核定位功能。VP1蛋白C端氨基酸与VP2的N端氨基酸序列相互重叠。 VP2蛋白中含有病毒的保守序列，可能是产生完整结构蛋白和成熟病毒粒子的必需功能区域。VP2基因序列决定着细小病毒的种系进化以及病毒的血凝活性、组织嗜性以及宿主范围。皮炎型毒株与弱毒株以及强毒株之间的氨基酸差异均位于VP2基因编码区。 VP3与病毒的感染性相关，完整的病毒粒子富含VP3，而当没有VP3只富含VP2时，病毒不能感染组织和细胞。 非结构蛋白 非结构蛋白有3种NS1、NS2、NS3，其分子质量分别为75.5ku、18ku、12.4ku,由5’端ORF的基因编码，NS1是PPV基因组本身编码的反式激活蛋白，具有内切酶作用和共价结合5’末端并具有特异部位的解链活性,对PPV早期和晚期的转录有重要调节作用，在临床上可用NS1来区别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪。 NS2、NS3分别含有161个氨基酸和106个氨基酸，这2 种蛋白质的功能目前还不十分清楚。 致病机理 PPV的致病性分为两个方面首先是对母猪受精卵细胞的影响，其次是对胎儿发育的影响。PPV能顽固地吸附在母猪受精卵细胞透明层的外表面，同时部分PPV能穿过透明带而进入卵细胞，并且其透明带外的卵细胞层里可以看到细胞碎片。 PPV还能使母猪的黄体发生萎缩。如果怀孕母猪感染了PPV，则妊娠黄体发生萎缩，使之失去了正常时抑制排卵和分泌孕酮的功能，最终出现流产、死胎、胚胎死亡、木乃伊胎和不规律的发情周期。 血清学诊断主要包括血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)、血清中和试验( SN)、乳胶凝集试验 ( LA )、免疫荧光技术(IF)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。分子生物学诊断方法包括单克隆单克隆抗体技术、PCR、核酸探针技术、银加强胶体金技术、SYBRGreen实时荧光定量PCR、LAMP等。 * * 猪细小病毒病研究进展 池洪树 1110658010 猪PPV属于细小病毒科、细小病毒属，外观呈六角形或圆形，无囊膜，二十面体轴立体对称，核衣壳由32个壳粒组成。PPV核酸为单股线状负链DNA.该病毒有较强的耐热能力，56℃48小时、70℃2小时病毒的感染性和血凝性均无明显改变，但80℃5分钟可使感染性和血凝活性均丧失。对酸碱的抵抗力较强，在pH 3 ~ 10范围内感染性无明显变化。对酶、脂溶剂及有机溶剂具有很强的抵抗力，但0.5%漂白粉、1% ~ 1.5%氢氧化钠5分钟能杀灭PPV, 2%戊二醛需20分钟,甲醛蒸气和紫外线需要相当长才能杀死PPV。在pH9.0的甘油缓冲盐水中或在-20℃以下能保存一年以上