原子力显微镜在生物领域的应用.PDFVIP

Application 天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7 号楼1、3 层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 原子力显微镜在生物领域的应用 在AFM 诞生最初的一段时间主要应用于电化学、材料科学等领域。近些年，人们 逐渐探索着运用AFM 对生物样品进行纳米水平的观测及显微操作等。与其它显微镜相 比，AFM 的纳米量级的高空间分辨率尤为突出，横向分辨率可达0.1 ～0.2nm ，纵向分 辨率高达0.01nm。此外，它不但能够对生理状态下的样品成像，而且可以实时动态地 研究样品结构和功能的关系。故而，AFM 成为纳米尺度上研究物质结构、特性和相互 作用的有力手段。 1. 形态结构 作为新兴的形态结构成像技术，AFM 实现了对接近自然生理条件下生物样品的观 察。这主要由于它具备以下几个特点: （1 ）与扫描电镜和透射电镜这些高分辨的观测技 术相比，样品制备过程简便，可以不需染色、包埋、电镀、电子束的照射等处理过程; （2 ）除对大气中干燥固定后样品的观察外，还能对液体中样品成像; （3 ）可以根据观 察者的要求，调节样品所处的温度、湿度、大气、真空等观察条件。目前，AFM 已广 泛地应用于细胞及蛋白、多糖、核酸等生物大分子结构的研究中。对一个细胞而言，AFM 不但能够提供长度、宽度、高度等形态方面的信息，还可以满足人们对膜上的离子通道、 丝状伪足、细胞间连接等细微结构的研究，甚至还可清楚地观察到膜身的骨架结构。 Application 天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7 号楼1、3 层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 形貌像 微分像 液体中癌细胞的测量（HHS AFM ） 2. 力学特性 由于利用AFM 可对扫描各点高度及作用力的测量，这就意味着我们不仅可以获取生物 样品的表面形态和三维结构，还可以得到其表面硬度、粘弹性、摩擦力等力学特性的表 面图谱。例如AFM 在扫描样品时，探针尖端作用样品可使样品产生可测量的凹陷。当 应力与应变力成线性关系时，样品发生的变形属弹性变化，即撤销力时样品可恢复原有 形态。我们利用凹陷的深度数据就能够获取有关样品局部的弹性信息。 3. 分子间力 将很高的空间分辨率与敏感且准确的力学感应性相结合，是AFM 的一个极为显著的特 点。通过将探针连接在弹性系数很小的悬臂上，AFM 对力的测量敏感性可达到pn 水平。 到目前为止，AFM 已经广泛地运用于测量溶液中生物分子间相互作用如与生物反应有 关的水合力的研究。利用这些研究结果还有助于对生物分子结构和机械性能进行分析。 例如，蛋白质依靠多种非共价作用而保持其结构稳定，通过机械或化学的方法将蛋白伸 展后，可以利用AFM 直接测量稳定蛋白结构的作用力，并进一步探究这些力对蛋白结 Application 天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7 号楼1、3 层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 构的影响。 4. 显微操作 通过在纳米级水平调控探针的位置和施加力，AFM 可以实现对生物分子进行物理操作 如切割生物结构，转移分子至特定位置。在一定的范围调整施加力，AFM 在成像的同 时即可对样品进行操作。施加力的范围主要由悬臂的力学常数和探针粗细决定。与标准 显维切割技术相比，AFM 对目标区域切割、提取等操作具有更准确的特点。 5. AFM 在染色体研究方面的进展 AFM 的高分辨成像和简便的样品制备过程吸引了众 多学者利用它对染色体结构 进行研究。但早期由于镶嵌于 30nm 蛋白质层的 RNA 吸附在染色体的表面，同时盐、 细