淋巴细胞和病毒载量测定的技术要求1225.pptVIP

T淋巴细胞和病毒载量测定的技术要求 T淋巴细胞检测 实验室要求 功能分区： 实验室原则上应分为样品处理区和流式细胞仪检测区 样品处理区应达到生物安全Ⅱ级（BSL-2）实验室要求，用于样品处理、流式检测样品制备 流式细胞仪检测区用于制备好的样品上机检测 设施和设备： 样品处理区：生物安全柜、离心机、冰箱、水浴箱、旋转振荡器、精确移液器（5μl?50μl、20μl?200μl、200μl?1000μl）。 流式细胞仪检测区：流式细胞仪 T淋巴细胞检测标本采集 标本质量的好坏直接关系到检测结果的准确性 标本：全血（静脉血 ） 抗凝剂：CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠 用一次性注射器抽取一定量静脉血2ml注入含有抗凝剂的真空采血管， 或用蝶形针直接采集到含有抗凝剂的真空采血管 上下轻轻颠倒8-10，禁止剧烈振荡 对所有样品编号，并写明日期和收集时间 保存和运输 在室温下（18?23℃）保存和运输样品，避免极端温度（冷冻或过热）。 超过37℃的温度会破坏细胞，对血液学和流式细胞仪的检测有影响。天气热时，需要用一个隔热的容器装样品，并且把这个容器放于另一个有冰袋和吸热物质的容器中。禁止冰袋直接接触样品。 运输过程禁止剧烈震荡。 样品接收 样品到达以后立即检查试管及其所装的血样。 如有以下现象发生，采取正确的方法处理： 如果样品较热或较冷，但没有明显的溶血或结冰，可以处理样品，但要在工作表的报告上注明温度条件。不要马上加热和冷冻样品以使其达到室温，因为这样会对免疫表型检测的结果产生不利的影响，散射光模式的不正常会显示出所受到的影响。 不可检测溶血或结冰的样品。 不可检测凝血的样品。 如果样品的采集时间已超出48h，不可检测。 做好样品登记和记录 检测 用K3EDTA抗凝，收集样品应在30h以内，尽早（8h以内）处理。 用枸橼酸钠或肝素抗凝，收集样品在48h以内，尽早（8h以内）处理。 实验资料的记录 实验应及时、准确地记录结果。 实验记录中应包括以下内容：日期、操作者、所有样品、实验内容、过程（步骤）、结果及有无事故等。 整个实验室的实验资料要统一有专人负责，按固定格式记录在案。 计算机生成的实验结果，存档备案；定期拷贝计算机结果文档，备案保存。 检测和质控 按照检测的SOP进行检测 定期质量控制（室内和室间） 每次领取检测试剂时，注意领取质控试剂。 日常维护的重要性 保持仪器表面清洁，避免灰尘。 保持管路清洁。 每次做实验过程中和结束后冲洗机器管路。 HIV病毒载量检测 实验室功能分区 实验室原则上应分为4个独立工作区 试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区，并设在不同房间。前两区为扩增前区，后两区为扩增后区。各区的功能是： 试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。 样品处理区：样品登记、分装；核酸提取、保存和加样。套式PCR的第二轮加样不能在此区。 扩增区：核酸扩增。 扩增产物分析区：扩增产物的电泳、杂交、成像、序列测定、结果分析、登记及报告。 扩增前区与扩增后区应严格分开，须使用不同的房间，两区之间最好有一定的间隔距离。 设施和设备 根据检测项目配备相应的设施和设备。 试剂准备区：冰箱、洁净工作台、离心机、加样器、振荡器、废弃物容器、紫外灯。 样品处理区：冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴、上下水设备、废弃物容器、紫外灯。 扩增区：核酸扩增设备、冰箱、离心机、加样器、废弃物容器、紫外灯。 扩增产物分析区：冰箱、离心机、加样器、电泳仪、振荡器、恒温水浴、紫外透射仪、摄影/像设备、上下水设备、废弃物容器、核酸污染物处理设备，紫外灯等。 测定HIV RNA应配备-80℃冰箱，上述其它冰箱为2-8℃和-20℃。 各区域应备有专用的或一次性工作服、帽子和鞋套，必要时配备防紫外线眼镜和/或口罩。 标本采集和保存 标本质量的好坏直接关系到检测结果的准确性，甚至能否检测出或污染（假阳性） 标本：血浆 抗凝剂：EDTA或枸橼酸钠抗凝（EDTA钠盐是首选的抗凝剂，不用肝素抗凝 用一次性注射器抽取一定量静脉血3-5ML注入含有抗凝剂的真空采血管， 或用蝶形针直接采集到含有抗凝剂的真空采血管 上下轻轻颠倒8-10，禁止剧烈振荡 室温下放置1-2小时，然后用3000转/分钟离心15分钟。应在6小时内分离血球和血浆（如果做不到就应该使用血浆分离管，立即离心4℃存放，需要保存30小时以上就应该放在-70℃），吸取血浆分装在螺旋冒的血浆冻存管内，每个人分装2个管，每管约装1 ml血浆（或一管1.5 ml血浆），分离保存的器材（枪头、冻存管）要用高压消毒处理过的、一次性的手套采用无粉手套。 进行HIV病毒载量检测的样品，应冻存于-20℃以下，如需保存3个月以上应置于-80℃。 标本类