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利用蚕豆根细胞微核技术检测 洗发水的毒性 姓名：李文龙 马建春 班级：2012级生物科学一班 1. 实验目的 掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。 2. 材料与方法 2.1 实验材料 蚕豆种子、洗发水、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、载玻片、盖玻片、烧杯、卡诺氏固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液、NaN3、纱布等。 2.2 毒液配制 选取所测洗发水，按平时所用比例与水混合均匀。 2.3实验方法 2.3.1 浸种 择饱满、均匀的20粒种子，洗净后用蒸馏水常规浸种24h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入干净的培养皿内培养。 2.3.2 催芽 待种子吸胀后，用潮湿的纱布松散包裹置于盆中，纱布上载盖一层湿水的毛巾，催芽约1—2天。 2.3.3 被检测液处理根尖 各取10粒，分别用蒸馏水（自来水）和毒液培养种子1天。 2.3.4 根尖细胞恢复培养 处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于干净培养皿恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。以上各步操作温度均在25℃下进行。 2.3.5 根尖细胞固定 将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm左右长的幼根，用卡诺氏液固定5～6h。 2.3.6 酸解 用蒸馏水浸洗固定好的幼根3次，每次5min，吸净蒸馏水，加入盐酸酒精解离液酸解10min，幼根软化即可。 2.3.7染色 吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。最后浸于水中。制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色20min，之后方可压片观察。 2.3.8 压片观察 对处理的根尖分生组织进行常规压片，每个处理各取3个根尖压片。在高倍镜下观察压片根尖分生区细胞分散良好的区域，并统计不少于1000个细胞中的微核数，然后再统计算出每个根尖的MCN‰。 3. 结果统计 对于蚕豆微核实验中微核千分率的计算可采用以下公式： MCN‰=某测试样点（或对照组）观察到的MCN数／某测试样点（或对照组）观察到的细胞数×1000‰ 污染指数（PI）= 根据《全国生物技术监测规范—蚕豆根尖微核技术》规定的污染指数划分标准，采用污染指数（PI）值来划分受污染程度。此方法可避免因实验条件等因素带来的MCN‰本底的波动，标准见表1 。凡数值在上、下限时定为上一级污染。 表1 污染指数PI值评价水质标准表 Table1 Pollution Index for evaluation of water quality standards value of PI table 污染指数PI值 水质污染等级 0 ～ 1.5 基本无污染 1.5 ～ 2.0 轻污染 2.0 ～ 3.5 中污染 3.5以上 重污染