专题32月季的花药培养讲.pptVIP

被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要部分。 注意： ①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成） ②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。 （四）影响花药培养的因素 月季的为MS培养基 材料的选取 （一）材料的选取 焙花青-铬矾 （二）材料的消毒 无菌吸水纸 （三）接种和培养 无菌 （三）接种和培养 愈伤组织 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 为了挑选到单核期的花药，选择什么样的材料？该材料还有什么优点？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 菌少、易消毒。 完全未开放花蕾 （一）材料选取 通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 最常用的方法：醋酸洋红法。 某些植物的花粉细胞核不易着色， 采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 1.月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。 （五）实验操作 ①醋酸洋红法染色机理 醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色 。 ②醋酸洋红的配置 2、醋酸洋红法 将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。 将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。 ③染色操作 3、焙花青—铬钒法 ①卡诺氏固定液的配制方法 将无水酒精与冰醋酸按体积比为3 ：1的比例混匀 将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。 ②焙花青—铬钒溶液的配制方法 ③染色操作 花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。 (二)材料的消毒： 花蕾 （70％酒精） 大约30s （无菌水） 清洗 （无菌吸水纸） 吸干水分 （1％氯化汞溶液） 2～4min （无菌水） 冲洗 月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比较，二者有何不同？ 在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗 . 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 （三）接种和培养 在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药 ②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 1、剥取花药 ①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织 注意： ①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 3、培养 ②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体 长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株 2、接种 立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。 在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的） 4、鉴定和筛选 ③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 实验操作的流程包括： （一） ____________； （二） ____________； （三） ____________。 材料的消毒 接种和培养 1．选择花药时一般通过____确定花粉发育时期，此时需要对花粉细胞核进行染色，最常用的染色剂是_________和___________，它们分别可以将细胞核染成____色和_____色。 2．在使用焙花青－铬钒溶液时，需要首先将花药用______________处理20min。该试剂的配制方法是将__________________按体积比为_______的比例混合均匀。 阅读“（一）材料的选取”，回答下列问题： 镜检 醋酸洋红 蓝黑 红 卡诺氏固定液 无水酒精与冰醋酸 3 ：1 阅读“（二）材料的消毒”，填写下列流程图： 花蕾 （______） 清洗 吸干水分 消毒2～4min 冲洗3～5次 浸泡约30s （______） （_________） （___________） （_______