HPLC法测定肠宁灵胶囊中异补骨脂素含量_0.docVIP

HPLC法测定肠宁灵胶囊中异补骨脂素含量 【摘要】 目的：建立肠宁灵胶囊含量测定 方法 。方法：采用HPLC法测定。色谱柱：Kromasil C18柱，流动相：甲醇—水(60：40)，检测波长：245nm，柱温：40，流速:0.81ml/min。结果：异补骨脂素进样量在0.026～0.312μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998)；平均加样回收率为98.6529%，RSD为1.43%(n=6)。结论：该方法操作简便易行，专署性强，准确可靠，可用于肠宁灵胶囊的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法；肠宁灵胶囊/化学合成；异补骨脂素/标准 肠宁灵胶囊是我校正在 研究 开发的一种新药，它是由补骨脂(盐)160g，白术(炒)160g，山药(炒)120g，茯苓120g，五倍子80g，秦皮80g，肉豆蔻(煨)80g，木香(煨)40g，吴茱萸40g,炙甘草40g等10味药组成的复方制剂，可用于 治疗 慢性非特异性溃疡性结肠炎,效果良好。采用高效液相色谱法对肠宁灵胶囊中的异补骨脂素进行含量测定，以控制其质量，使各批制剂之间的药效稳定，现报道如下。 1 材料 Waters 600E双泵头柱塞往复泵，Waters 2487双波长紫外检测器，Chromstation数据处理系统。异补骨脂素对照品( 中国 药品生物制品检定所，供含量测定用，批号:0738-200108)；肠宁灵胶囊(自制，批号20050314；缺补骨脂的阴性样品(自制)；甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其它试剂均为 分析 纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18色谱柱(Φ4.6mm×250mm)；检测波长：245nm；流动相：甲醇水(60：40)；柱温：40；流速：0.8ml/min； 理论 板数按异补骨脂素峰 计算 应分别不低于2000。 2.2 溶液的制备 　　2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含26μg的溶液，即得(10以下保存)。 2.2.2 供试品溶液的制备 取肠宁灵胶囊 内容 物约0.35g，精密称定,置50ml容量瓶中，加甲醇40ml，超声处理30min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。 2.2.3 测定方法 分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 2.3 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶液1、3、6、9、12μl，分别注入液相色谱仪，测定。以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，回归方程为Y=9114067X-6562.64，r=0.9998，结果表明异补骨脂素进样量在0.026-0.312μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。 2.4 精密度试验 取同一肠宁灵胶囊供试品溶液，重复进样6次，测定异补骨脂素的含量，结果异补骨脂素平均含量为0.723μg/粒，RSD为1.795，表明异补骨脂素的精密度良好。 2.5 稳定性考察 分别取放置4、8、12、16、20、24h的同一对照品溶液与供试品溶液,测定异补骨脂素含量，以考察其稳定性，结果对照品溶液峰面积积分值RSD为1.21%，供试品浴液峰面积积分值RSD为2.47%，表明对照品溶液与供试品溶液至少在24h内稳定。 2.6 重复性试验 取同一批肠宁灵胶囊样品(批号适量，6份，精密称定，同法制备供试品溶液，依法测定异补骨脂素的含量，结果异补骨脂素平均含量为0.729mg/粒，RSD为1.22%，表明异补骨脂素的重复性良好。 2.7 加样回收率试验 精密称取异补骨脂素对照品适量，加入到已测知异补骨脂素含量的肠宁灵胶囊(异补骨脂素含量为0.2143%，即0.729mg/粒)中，同法操作制备供试品溶液,测定异补骨脂素的含量， 计算 回收率。回收率=实测值-样品中含量对照品加入量×100%，测定结果见表1。表1 回收率实验结果No取样量注：χ=98.6529% RSD=1.43%2.8 阴性对照试验 为进一步考察实验设计及含量测定 方法 的可行性和专属性，取缺补骨脂的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。精密吸取10μl注入液相色谱仪，按上述方法测定，结果表明补骨脂阴性对照品的色谱图在异补骨脂素相应的保留时间附近无干扰峰，证明本法具有良好的专属性。 2.9 样品测定结果 按上述方法测定样品3批，样品含量见表2。表2 肠宁灵胶囊中异补骨脂素的含量测定结果 3 讨论 3.1 肠宁灵胶囊供试品溶液制备方法的选择 在预试验中，分别采用了加热回流和超声波提取的方法以正交试验的形式对肠宁灵胶囊中的异补骨脂素的含量进行测定，结果加热回流和超声