阳离子铝酞菁-黏多糖缔合物荧光探针测定生物样品中的溶菌酶.pdfVIP

第42 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第7 期 2014 年7 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 962 ~967 DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.140047 阳离子铝酞菁-黏多糖缔合物荧光探针测定生物样品中的溶菌酶 陈林 黄 萍 杨惠卿 邓雅斌 李东辉* (厦门大学医学院抗癌研究中心,厦门361102) 摘 要 在弱酸性介质中,具有红区发射特性的强荧光化合物阳离子铝酞菁(TTMAAlPc)在带磺酸基团的低 浓度阴离子黏多糖(肝素,HP)的存在下,发生诱导聚集,导致酞菁荧光几乎完全猝灭。 此聚集缔合物可作为 溶菌酶的荧光底物,在溶菌酶的水解作用下,HP降解为小分子片段,破坏了TTMAAlPc 的诱导聚集行为而使 其释放,体系荧光显著恢复。 据此现象,建立了测定溶菌酶的新方法。 结合荧光光谱与荧光各向异性技术对 反应机理进行了探讨。 确定了最佳反应条件(醋酸缓冲体系,pH4.0、反应温度70 °C、反应时间30 min),考察 了共存物质的影响。 在最佳条件下,方法的线性回归方程为y=-30.12121+214.65772x,r=0.99871,线性范 围为0.2~2 mg/ L,检出限0.015 mg/ L。 本研究操作简便且有较好的选择性和灵敏度。 本方法用于溶菌酶实 际样品的测定,并与常规的比浊法进行了比较,结果符合良好。 本研究将阳离子金属酞菁荧光探针用于酶分 析,开拓了酞菁荧光探针的应用范围。 关键词 溶菌酶;酞菁;荧光;测定 1 引 言 溶菌酶(Lysozyme,LSZ)广泛存在于禽类的蛋清中和哺乳动物的泪液、唾液、血浆、尿、乳汁、白细胞 [1] 及其他体液(如淋液)及组织(如肝、肾)细胞内 。 由于溶菌酶能催化水解细胞壁主成分之一的黏多糖 [2] 中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键 ,使细胞壁不溶性多糖分解成可溶性糖 肽,导致细菌内容物逸出而使细胞壁溶解,从而起到杀菌作用。 因而,溶菌酶在医药和食品工业中应用 [3] 广泛 ,其定量分析也是日常工作的重要环节。 [4] [5] [6] [7,8] 溶菌酶常用的检测方法有比浊法 、琼脂糖扩散法 、高效液相色谱法(HPLC) 、荧光法 、基 [9] [10] [11,12] 于原子力显微镜的微悬臂传感器法 、共振瑞利散射法 、质谱法(MS) 、酶联免疫吸附法 [13] (ELISA) 等,上述方法或需抗体等昂贵试剂,或使用大型仪器,操作步骤较复杂,有的方法还需无菌 条件。 因此,建立简便快速的溶菌酶测定法具有现实意义。 酞菁化合物由于具有优良的光物理、光化学性质,自20世纪80 年代起即受到了广泛的研究应用。 作为光动力治疗光敏剂则是其在生物医学领域最重要的研究方向。 90 年代中后期,酞菁化合物作为荧 光探针的研究开始引起关注,但所涉及的酞菁化合物基本为阴离子和非离子酞菁。 阳离子酞菁的合成 与应用虽也一定有报道,但数量很少,且研究内容仍然主要集中于光动力治疗方面,直到近年才有阳离 [14] 子酞菁与生物大分子相互作用的报