基于图像处理技术的小球藻荧光图像自动计数方法研究.pdfVIP

16 《渔业现代化~2o12年第39卷第5期 基于图像处理技术的小球藻荧光图像 自动计数方法研究 刘世晶，陈 军，刘兴国，管崇武 (农业部渔业装备与工程技术重点实验室 ，中国水产科学研究院渔业机械仪器研究所，上海200092) 摘要 ：分析了小球藻叶绿素 a的荧光激发特性，利用图像处理技术，提 出了基于藻类荧光激发效应的小球藻 自动计数方法。利用450nm荧光作为激发光源，得到波长为660—690nm的小球藻荧光显微 图像 ；利用红 色滤光片去除其它入射光的影响，使 图像 中只包含小球藻荧光特性。调节光源强度，增加 目标与背景之间的 对比度 ；通过灰度变换，得到256级灰度图像 ，分析图像灰度特征，确定最佳图像分割阈值。实验证明此方法 能够很好的区分藻类和杂质，计算速度快，为藻类 自动计数提供了一种新的方法。 关键词 ：小球藻；荧光激发效应；机器视觉；自动计数 doi：10．3969／j．issn．1007-9580．2012．05．004 中图分类号：Q949．2 文献标识码：A 文章编号：1007-9580(2012)05-016-05 小球藻(Chlorellaspp．)属于绿藻门、绿藻纲、 利用三维荧光谱图分析原水输送过程中藻类和有 绿球藻 目、卵孢藻科、小球藻属的单细胞藻类，直 机物的变化，发现三维荧光强度 F(A．U)与叶绿 径2～12 m 。小球藻蛋 白含量高，是水生动物 素a浓度、藻密度呈较好的线性关系。但基于 的高营养天然饵料，其光合作用非常强，是其它植 PSoC的荧光检测方法与三维荧光谱图分析法都 物的几十倍 ，在提高水体溶氧方面作用明显。小 是对藻类浓度进行估算，没有实现精确计数。 球藻在活性物质提取 、水产养殖、环境治理等 有关小球藻的一些光谱行为，已有一些研究 诸多方面具有很高的研究和应用价值。对小球藻 报道 “。利用叶绿素 a的荧光特性，藻类形状 生物量的测定是小球藻研究的重要项 目之一 3¨J。 对计数精度的影响大大降低，根据藻类荧光激发 传统的生物量测定方法有：细胞计数法、传统叶绿 光波长，选择对应的滤光片，可以很容易将 目标藻 素 a测定法和干重法 J。细胞计数法计数工作量 类与杂质区分开来，且利用荧光图像对藻类进行 大，且重现性极差，存在人为因素影响，误差较大， 计数，对具有不同荧光激发光的藻类区分作用明 而叶绿素 a测定法与干重法测量操作相当繁琐， 显。本文将小球藻作为实验样本，利用小球藻叶 耗费时间长，不利于多样 品的连续测定。 绿素 a的荧光激发特性，采集小球藻荧光图像，通 近年来，不断有 国内外学者将 图像处理技 过分析图像色度值特征，确定分割阈值，并利用四 术 和藻类荧光效应应用于藻类计数。李金忠 邻域标记法 实现对小球藻的计数统计，为小球 等 利用藻类灰度 图像和形态学方法对两种藻 藻显微图像精确计数提供一种新方法。 类进行区分计数，但是受图像背景亮度影响，背景 1 材料与方法 和 目标藻类区分 比较 困难 ，且极易受到杂质的干 扰；秦松等 利用显微彩色图像对单一藻类进行 1．1 硬件与软件 计数，但测量结果受藻类形状和杂质的影响比较 试验采用实验室培育的单一小球藻试验液， 严重；李丹等 利用基于 PSoC的荧光检测系统 小球藻密度为500万个／ml。实验用显微镜选择 对湖泊中的叶绿素a浓度进行检测；汤金伟等 奥林 巴斯BX51，配套荧光光源。相机采用显微镜 收稿 日期：2012-08—17 修 回日期：2012-09—15 基金项 目：国家大宗淡水鱼产业技术体系 (nycytx49)；公益性行业 (农业)科研专项 “淡