二价金属离子对磷脂聚集态的影响-北京大学教务部.doc

二价金属离子对磷脂聚集态的影响 The influence of divalent metal ions on the aggregation properties of EYPC 化学与分子工程学院2000级 俞科兵 College of chemistry and molecular engineering Yu Kebing 摘要 主要通过浊度分析和激光光散射光谱研究了二价金属离子（Ca2＋、Cu2＋和Mn2＋spectroscopy are applied to follow the effects of divalent metal ions on EYPC vesicles. We conclude free divalent metal ions act to precipitate unilamellar PC vesicles whereas, in combination with sodium taurocholate, sodium glycocholate, sodium deoxycholate or sodium deoxytaurocholate, these ions act to decrease the size of PC vesicles and some induce a phase transition from PC vesicles to mixed micelles. Keywords: phosphatidylcholine, divalent metal ions, bile salts, aggregation properties, UV-vis 1．前言 1.1 胆汁酸 胆汁酸是胆汁中存在的一大类胆烷酸的总称，人体中由胆固醇合成而来。胆酸可分为初级胆汁酸和次级胆汁酸。初级胆汁酸主要为胆酸和鹅脱氧胆酸，二者在结构上区别为胆酸含三个羟基（3α,7α,12α）而鹅脱氧胆酸为两个羟基（3α，7α）。初级胆汁酸羧基侧链与其他分子结合后生成初级结合胆汁酸，比如牛磺胆酸，甘氨胆酸等。初级胆汁酸失去一个7-α羟基后生成次级胆汁酸，如脱氧胆酸，脱氧牛磺胆酸等。 1.2 磷脂酰胆碱 磷脂酰胆碱也称为卵磷脂(phosphatidylcholine PC，结构见图1)，系统名称为1,2－二酰基－sn－甘油－3－磷酸胆碱 (1,2-diacyl-sn-glycero-3-phosphocholine)。在磷脂结构中，1,2位羟基上接的是长链的非极性基团，称为尾部。而3位羟基上接的是极性的磷酸胆碱，称为头部。当磷脂溶于水溶液中时，其极性部位指向水相而非极性部位由于不溶于水而聚集在一起形成中间疏水区，外边亲水的磷脂聚集体，而具体的结构根据磷脂浓度的不同有所差异。当PC浓度小于cmc (critical micelle concentration) 时，磷脂形成单层的膜结构；当PC浓度大于cmc但小于cvc (critical vesicle concentration) 时，磷脂形成球状胶束或棒状胶束；当PC浓度大于cvc时，磷脂将形成双层囊泡或多层囊泡。在胆囊里这些不同结构的磷脂完成了胆固醇的溶解和转运。 图1 EYPC的分子结构图 Fig.1 The structure of EYPC 1.3 研究背景 在胆汁中90％以上的磷脂为卵磷脂，并与胆盐和胆固醇形成混合囊泡或胶团，实现溶解和排泄胆固醇的生理功能，其中胆盐起增溶磷脂的作用，一旦这一过程发生异常将导致胆固醇的析出，形成结石。因此，有关胆盐和磷脂间相互作用以及由此引起磷脂相转变的研究已有相当多的报道。Catharina P. Nibbering等[1]的研究表明，EYPC/TC比值改变时，胶团的平均水化动力学半径(Rh)发生变化。EYPC含量增加，Rh增加；TC含量增加，Rh降低。并且稀释EYPC/NaTC溶液可以使胶束(micelles)转化为囊泡(vesicles)。胆汁中除含有大量上述有机物外，还含有大量金属离子，其中包括相当含量的二价金属离子，如：Ca2＋、Cu2＋、Mn2+等。近几年的研究[2-6]表明金属离子与胆盐作用将改变其胶化性质，从而影响其生物功能。我们的研究结果表明[7]，二价金属离子能够通过配位与胆盐作用，改变胆盐的聚集状态。但相关的二价金属离子与卵磷脂作用改变其聚集状态，尤其是对胆盐/卵磷脂混合胶团聚集态的影响尚未见报道。在本文中，我们通过浊度、激光光散射、透射电镜分析研究了二价金属离子(Ca2+、Cu2+、Zn2+和Mn2+)在胆盐(TC,GC,TDC)存在的环境中与卵磷脂作用改变其胶团的聚集状态，为研究胆固醇结石的形成机理提供依据。 2．实验部分 2.1 试剂 胆汁酸钠(TC,TDC,DC)为Si