5第五章愈伤组织培养.ppt

第五章 愈伤组织的培养 第一节 愈伤组织的诱导和分化 第二节 愈伤组织中的形态发生 第三节 人工种子 第一节 愈伤组织的诱导和分化 1 愈伤组织概念 2 愈伤组织的诱导 3 影响愈伤组织诱导形成的主要因素 2 愈伤组织的诱导 2.1 来源：依外植体不同，愈伤组织可以发生自组织（如：形成层、皮层、髓、次生韧皮部及木薄壁组织和表皮等）、器官（如子叶、叶茎段、根、幼胚等）。 诱导愈伤组织成败的关键在于培养的条件，主要是激素的种类及浓度（外源激素水平）。 2.2 培养的条件-植物激素的作用 生长素类：2,4-D、IAA和NAA等，浓度0.01～10mg·L-1， 细胞分裂素类：KT、6-BA和玉米素等，浓度0.1～10mg·L-1。 生长素和细胞分裂素对保持愈伤组织的快速生长是必要的，特别是两者结合应用时，能更强烈地刺激愈伤组织的形成。 注：在诱导愈伤组织生长时，要注意到因植物材料不同而采用不同的植物生长物质和不同的浓度。 2.3 愈伤组织的形成 从外植体脱分化形成典型的愈伤组织大致可分为三个时期： 2.3.1 起始期： 起始期细胞内发生的变化 气体交换增加，如氧气的吸收增加 激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，蛋白质和核酸的合成，诱导细胞开始分裂。 RNA含量增加 蛋白质量增加（每个细胞的总增加量为200%） 酶活性增强 细胞的大小仍然和外植体时一样，没有多大改变 2.3.2 分裂期: 分裂期：外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂增生子细胞的过程。 脱分化：细胞由静止期进入分裂期，恢复分裂机能。 外层细胞在外源激素的作用下，迅速分裂，使得外层细胞数目增加， 细胞体积缩小，无液泡，细胞平均鲜重下降。细胞的核和核仁增大到最大。逐步回到分生组织状态。 细胞中RNA含量持续上升，达到最大值。 随着细胞不断分裂和生长，细胞总干重、蛋白质和核酸量大大增加，新细胞壁合成极快。 细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结构，维持其不分化的状态，颜色浅而透明。 2.3.3 形成期： 形成期是指在分裂期的末期，细胞内开始出现一系列形态和生理上的变化，从而使愈伤组织内产生不同形态和功能的细胞。 细胞类型包括：薄壁细胞、分生细胞、色素细胞、纤维细胞，等等。 细胞分裂部位和方向发生改变：内部细胞发生分裂，形成瘤状或片状的分生组织结节，分生组织结节可以成为愈伤组织的生长中心，也可以进一步分化形成维管组织结节，最终形成部分维管组织如管胞、纤维组织等，但不形成维管系统。 细胞的体积相对稳定，不再减少。 出现了各种类型的细胞：如管胞、纤维细胞、薄壁细胞、分生细胞、色素细胞等。 生长旺盛的愈伤组织呈乳白色、白色或 浅绿色，老化的多转化为黄色或褐色。 2.4 愈伤组织的分类 2.5 愈伤组织生长周期 外植体的细胞经过起动、分裂和形成等一系列变化，形成了无序结构的愈伤组织。 由于原来培养基中营养不足或有毒代谢物的积累，导致愈伤组织停止生长，甚至老化变黑、死亡。 愈伤组织生长周期为2－4周。 如果要让愈伤组织继续生长增殖，必须定期地(如2～4周)将它们分成小块，接种到新鲜的培养基上，这样愈伤组织就可以长期保持旺盛的生长。 第一节 愈伤组织的诱导和分化 1 愈伤组织概念 2 愈伤组织的诱导 3 影响愈伤组织诱导形成的主要因素 3 影响愈伤组织诱导形成的主要因素 （1）不同植物形成愈伤组织的能力不同 ； 同一植物不同器官形成愈伤组织的能力不同； 同一植物同一器官不同生理状况的外植体形成愈伤组织的能力不同。 例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难； 花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难； 幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织 脱分化比较难。 3 影响愈伤组织诱导形成的主要因素 （2）培养基种类对愈伤组织诱导的影响。选择适当的基本培养基对愈伤的生长很重要。诱导愈伤组织常用的培养基为MS和B5。 （3）培养条件对愈伤组织诱导的影响: 湿度条件、温度条件、光照条件。 （4）外源激素对愈伤组织诱导的影响---重要因素。 优良愈伤组织具备的特性 1）高度的胚性，易于得到再生植株 2）分散性好，易于建立优良悬浮系 3）增殖能力旺盛 4）经过长期继代培养不丧失胚性。 第五章 愈伤组织的培养 第一节 愈伤组织的诱导和分化 第二节 愈伤组织中的形态发生 第三节 人工种子 第二节 愈伤组织中的形态发生 经过起动、分裂和形成期产生的愈伤组织，其中虽然发生了细胞分化，但是并没有器官发生。 只有满足某些条件，愈伤组织的细胞才会发生再分化，产生芽和根，进而发育成完整植株。 1 愈伤组织形态发生方式 2 愈伤组织器官发生-形成不定芽或不定根 3 愈伤组织胚状