流式细胞术在临床及科研中的应用.ppt

FC500 常用荧光染料的特性 Dual Parameter Histograms 应用分类 1、免疫表型分析 2、DNA含量及细胞周期分析 3、定量分析 4、细胞功能分析 5、凋亡研究 6、其它方面 免疫表型分析 1993年在波士顿召开的人类白细胞分化抗原会议（leukocyte differentiation antigen,HLDA）将CD抗原(cluster of differentiation)分为T细胞、B细胞、髓细胞、血小板、内皮细胞、自然杀伤细胞、活化抗原、黏附因子、细胞因子和细胞因子受体等九个组，确立了48种新抗原。1996年11月在神户召开的第六届HLDA会议上，又有30多种新抗原被确认，CD编号已达166个，CD抗原有197种。2000年7月，第七届人类白细胞分化抗原会议的召开，CD抗原已达247种。 生物学 我们想做什么? 细胞群 – 淋巴细胞, 单核细胞,粒细胞, 血小板, etc. 抗原组合 多少? 共表达? 表达密度? 抗原分布 表面 胞内 抗原表达:Important for optimal configuration 需要用多少的标志来确证感兴趣的细胞群? 它们在细胞上的分布是不是很近? 它们是构成性表达和调节性表达? 它们是否在不同的细胞上表达不同? 他们表达强还是弱? 抗原分布:Important for method optimization 表面,胞浆,核内 是共同检测还是分别检测? CD系列在免疫学中常被用于： （1）CD抗原的基因克隆，新CD抗原及新配体的发现； （2）CD抗原功能与结构的关系 （3）细胞激活途径和膜信号的传递； （4）细胞分化过程中的调控； （5）细胞亚群的功能。 淋巴细胞亚群 淋巴细胞亚群与疾病 监测细胞免疫状态 1.CD4+、CD8+T细胞减少：见于r免疫球蛋白缺乏症、胸腺 发育不良、严重联合免疫缺陷病。 2.CD8+T细胞增多见于病毒感染：HBV、CMV、EB等。 3.CD4+/CD8+比例异常： 进展期AIDS：CD4+细胞减少，CD8+细胞可以正常、增高或降低，比值下降；身免疫性疾病，如多发性硬化，CD4+/CD8+升高，CD8+减少；SLE病人的淋巴细胞变化可以反映该病的活动情况和器官的侵犯程度。 ABMT后免疫重建期间可有CD4减少，比值下降。 风湿性关节炎关节液中CD4+CD29+细胞增多。 多发性硬化（MS） 、SLE患者外周血CD4+CD45RA+细胞减少。 变态反应性疾病 CD19与CD23的检测 鉴别支气管炎与哮喘 CD203 变态反应性疾病CD203增强 CD63 CD63与支气管炎的疾病进程 黏附分子 HLA-B27检测 外周血HLAB27的表达及其表达程度与强直性脊柱炎的发生有很大程度的相关性. 循环血中活化血小板（CD62P、CD63）： 糖尿病伴微血管病变、冠心病、高血压病、高脂血症、脑血栓形成、短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化患者活化血小板百分率和绝对值显著高于正常人。而糖尿病无微血管病变、周围血管病变以及深静脉血栓形成患者活化血小板水平与正常人无显著差异。PTCA后24小时发展成急性血管闭塞或高度再狭窄的患者活化血小板CD62p、CD63增多，可以用于预测PTCA后急性缺血再发作的危险性。 热门研究 抗原特异性T细胞检测 树突状细胞（DC） 循环微转移肿瘤细胞 TLR1、TLR2、TLR4等 Normal Cell Cycle 淋巴瘤组织学分级与DNA倍体及S期细胞关系 Histology DNA Analysis S 期比值(%) Low -grade Diploid/ Aneuploid 1~5 Intermediate-grade Frequently Aneuploid 5 ~15 High-grade Frequently Aneuploid 15 依据Working formulation之分类， Low -grade NHL中有47%为Aneuploid在Intermediate-grade NHL中有71%为Aneuploid ；而High-grade NHL中有90%为Aneuploid DNA含量；很显然使用FCM也有助于NHL的诊断与分类，不过Aneuploid是否对预后有影响，则仍有待研究。有人认为高SPF是最重