毛细管电泳法检测结核杆菌蛋白多肽类抗原活性成分研究.pdfVIP

第26卷第 lO期 化 学 研 究 与 应 用 Vo1．26，No．10 2014年 l0月 ChemicalResearchandApplication Oct．，2014 文章编号：1004—1656(2014)10．1545-06 毛细管 电泳法检测结核杆菌蛋白 多肽类抗原活性成分研究 张 晖 ，薛洪宝 ，陈 勇 ，李柏青2，梁丽丽 ，陶兆林 (1．蚌埠医学院化学教研室，安徽 蚌埠 233030； 2．蚌埠医学院感染与免疫安徽省重点实验室，安徽 蚌埠 233030) 摘要：采用毛细管电泳法分离检测结核杆菌耐热抗原样品中的活性成分。熔融石英毛细管55cm(40cm处检 测窗 口)x50 i．d．；缓冲液：0．15otol·L 硼酸盐(含5gL·～PEG-4000，pH=10．92)；分离电压：+12kV；进样 压力：O．5psi(3．45kPa)，进样时间3．0s；分离温度：25~C；UV-Vis检测器检测波长：200nm。本方法能分离溶 菌酶标准蛋白和牛血清白蛋 白标准品，根据分子量大小能有效分离结核杆菌耐热抗原样品活性成分，线性回 归方程相关系数r2在0．99673以上，定量限在 l9．47 g·mL 左右。样品加标回收率在96．09％左右 ，相对标 准偏差小于8．13％，本方法与快速蛋白液相色谱法结果一致。该方法简便、灵敏、快速、可靠、重现性好 ，能用 于结核杆菌耐热抗原样品中活性成分测定。 关键词 ：毛细管电泳法(CE)；结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)；活性成分 ；快速蛋白液相色谱法(FPLC) 中图分类号：0657．8 文献标志码：A DeterminationofactiveingredientsinMycobacterium tuberculosis aannttiigenpepRtiiddeebbyycapfiillllaarryyel’e‘ctr‘opn。orests‘ ZHANG Hui ，XUE Hong—bao ‘，CHENYongzLIBai—qingzLIANGLi-liTAO Zhao—lin ， ， (1．DepartmentofChemistry，BengbuMedicalCollege，Bengbu233030，China； 2．AnhuiKeyLaboratoryofInfectionandImmuni~，BengbuMedicalCollege，Bengbu233030，China) Abstract：Asimplecapillaryelectrophoresis(CE)methodwasestablishedforthenaalysisofactiveingredientsinmycobacteriumtu- berculosisheat．resistantpeptideantigen(Mht．Ag)．TheanalyseswerecarriedoutonanP／ACEMTMDQcapillaryelectrophoresis system(BeckmanCoulter，USA)equippedwithanUV—Visdetector．Separationwasperformedinabarefused-silicacapillarywhich was55．0cmlong(40．0emtothedetector，50p,mi．d．)at20~C，anda0．15mol·L boratesolution(containing5gL‘～PEG-4000， pH=10．92)wasusedasbackgroundelectrolyte．Thesampleswereintroducedintothecapillaryunderapressureof0．5psi (3．45kPa