磷酸盐洗脱液再生IMAC-Cu蛋白质芯片.pdfVIP

第28卷 第2期 应 用 化 学 Vol_28Iss．2 2011年 2月 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY Feb．2011 磷酸盐洗脱液再生 IMAC—Cu蛋白质芯片 蔡 羽。 杜 涛 赵胜利 高春芳 (河南科技大学信息管理研究所 洛阳；河南科技大学材料学院 洛阳471003； 解放军第 150医院 洛阳) 摘 要 使用扫描电子显微镜 (SEM)和蛋 白质芯片检测系统考察 了磷酸盐洗脱液pH值和竞争洗脱剂对 IMAC．Cu蛋白质芯片再生的影响。结果表明，随着磷酸盐洗脱液pH值降低，芯片所吸附的蛋白质越容易被去 除，但对芯片表面化学结构的破坏也随之加剧。在洗脱液中加入竞争洗脱剂乙二胺四乙酸(EDTA)或甘氨酸 (Gly)可有效改善蛋白质的洗脱效果。当磷酸盐洗脱液 pH=6．5、竞争洗脱剂为0．02moL／LEDTA、洗脱时间 72h时，芯片的再生效果最佳。 关键词 蛋 白质芯片，磷酸盐洗脱液，再生 中图分类号：0647 文献标识码：A 文章编号：1000-0518(2011)02-0219-05 D0I：10．3724／SP．J．1O95．2011．0021l 蛋白质芯片一飞行质谱时间技术是继基因芯片之后的新一代生物芯片技术，它集芯片和质谱于一 身，具有分析速度快、简便易行、高灵敏度和高通量等特点 ¨ 。目前，蛋 白质芯片在疾病诊断、预防以及 新药开发等方面有着极强的优越性_3J，在很多领域有着广阔的发展前景，特别在恶性肿瘤标志物的筛 选方面已得到广泛应用 j。然而，蛋白质芯片价格高昂，并且主要为一次性的，没有再生利用，限制了它 的使用和推广，也给医务工作者和患者带来了不便 。本文基于固定金属离子亲和色谱(IMAC)洗脱及 再生的基本原理，初步研究了已使用过的IMAC．Cu蛋 白质芯片的再生行为，考察了磷酸盐洗脱液pH值 及竞争洗脱剂对再生效果的影响。 1 实验部分 将 已使用过的IMAC—Cu蛋白质芯片(Ciphergen公司)置于洗脱液中，以去除芯片上吸附的蛋 白质。 螯合铜离子后，对蛋 白质固定及检测，检测过程见参考文献[6]。其中芯池A为未曾使用的新鲜芯片作 为空白对照，B为再生芯片的空白对照，c为再生芯片吸附癌症患者血清蛋白后的质谱图，D为新鲜芯 片吸附癌症患者血清蛋白后的质谱图。洗脱液由含0．5mol／LNaC1的磷酸盐缓冲溶液和竞争洗脱剂两 部分组成，竞争洗脱剂为甘氨酸(Gly)或乙二胺四乙酸(EDTA)。其中，磷酸盐缓冲溶液由0．02mol／L磷 酸二氢钠和0．02mol／L磷酸二氢钾组成，用HC1与NaOH调节溶液的pH值。已使用过的IMAC—Cu蛋 白质芯片和癌症患者的血清蛋 白均来 自洛阳解放军第 150医院。磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、EDTA、 NaOH、NaCl、Gly与盐酸均为分析纯试剂。使用 日本 电子株式会社 JSM-5610LV型扫描 电子显微镜 (SEM)分析蛋白质芯片的表面形貌，利用美国Ciphergen生物系统公司的表面增强激光解析离子化一飞 行时间质谱仪(SELDI—TOF-MS)检测芯片表面蛋 白质的吸附效果。 2 结果与讨论 2．1 洗脱液 pH值的影响 在洗脱 72h时考察了不同pH值磷酸盐洗脱液对蛋白质芯片洗脱效果的影响，如图1所示。从图1 2010-04-12收稿，2010-07—15修回 国家 自然科学基金 资助项 目；河南省基础与前沿研究计划(072300440060) 通讯联系人：赵胜利，副教授；Tel：0379Fax：0379E-mail：slzhao@mail．haust．edu．cn；研究方向：蛋白质芯片制 备及再生 220 应 用 化 学 第28卷 可以看出，洗脱液pH=4．5时，芯片上吸附的蛋白质被完全去除，无任何残留。当pH值升高为5．5时， 芯池表面出现少量蛋白质残留，随着洗脱液pH值进一步升高，蛋白质的残