生物技术概论细胞工程20141020.ppt

一、病毒在园艺植物上的危害 病毒种类繁多，危害广。如表 危害植物的病毒:主要是靠无性繁殖的作物，在母株内逐代积累，危害日趋严重。 危害：给作物生产带来重大的损失。如产量严重降低，品质大大退化。葡萄扇叶病毒使葡萄减产10～18%。花卉上病毒的危害大大影响其观赏价值。 植物病毒病的防治——防重于治和综合防治 1、选育抗病品种 2、消灭传毒昆虫 3、用茎尖脱毒技术培育无毒苗 4、接种弱毒株来保护植物 这是一种“给庄稼种牛痘”的方法。许多国家已可用此法来预防蕃茄花叶病。 5、采用合理的栽培措施等 6、药物处理 现在还没有什么药物可治愈受病毒侵染的植物。  2 原理 热处理 (theomtherapy)，原理是当植物组织处于高于正常温度的环境中时，组织内部的病毒受热之后部分或全部钝化。 3 方法 温汤浸渍处理 ——适用于休眠器官、剪下的接穗或种植的材料，在50℃左右的温水中浸渍10min至数小时，方法简便易行，但易使材料受伤。 热空气处理 ——对活跃生长的茎尖效果较好，将生长的盆栽植株移入温热治疗室(箱)内，一般在35-40℃。处理时间因植物而异，短则几十分钟，长可达数月。 4 优缺点 优点：对设备要求不高，技术简单。 缺陷：1）热处理只能降低植株内病毒的含量，单独处理难以获得无毒材料；2）处理时间过长，会造成植株代谢紊乱，加大品种变异的可能性。 生产上通常采用热处理结合茎尖培养的方式，获得较高的脱毒率。 3 茎尖培养方法 有适当光源的简单解剖镜(8—40倍)、一套解剖刀。 在切取外植体之前一般须对茎芽进行表面消毒。 剥离茎尖时，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。 将接种好的茎尖置于22℃左右的温度下。每天以16h，2000-30001x的光照条件下培养。 在切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大又不能保证完全除去病毒。 4 影响微茎尖培养成功的因素 外植体的生理状态 生长活跃的芽上。例菊花—顶芽；草莓无区别。 外植体的大小 培养基及培养条件 使用固体培养基；加少量的生长素或细胞分裂素；光培养比暗培养效果好 香石竹脱毒的具体操作过和如下： （1）热处理：将盆栽植株在36～38℃下处理2周，或在36℃16小时和38℃8小时处理共30天，光照为3000lx。 （2）表面消毒：取叶腋间生出的侧芽，先用自来水冲洗，用75%的酒精消毒30秒，2.5%次氯酸钙或次氯酸钠溶液处理15分钟, 无菌蒸馏水清洗4次, 吸去多余水分。 （3）茎尖剥离：用解剖针剥掉幼叶，直到只剩下2个最幼小的叶原基。 （4）茎尖培养：用小刀片切下茎尖放入培养基。培养条件为25℃，光照16小时，光照强度为2000lx，平均两周进行一次转接，5～7周可获得单个小植株。 （三）其他途径脱毒 1. 愈伤组织培养脱毒 植物的器官和组织诱导产生愈伤组织，然后再分化产生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗。 产生无病毒植株的原因 病毒的复制速度赶不上细胞增殖速度；通过细胞突变获得抗病毒的抗性 应用局限 植株遗传性不稳定；有些植物的愈伤组织尚不能产生再生植株 2．茎尖微体嫁接 木本植物茎尖培养难以生根成植株，将实生苗砧木在人工培养基上种植培育，再从成年无病树枝上切取0.4—1.0mm茎尖，在砧木上进行试管微体嫁接，以获得无病毒幼苗。 3. 化学疗法脱毒 8—氮鸟嘌呤、2—硫脲嘧啶、杀稻瘟抗菌素、放线菌素D、庆大霉素等。如将100μg 2-硫脲嘧啶加入培养基可除去烟草愈伤组织中的PVY(马铃薯病毒)。 4. 珠心组织培养脱毒 柑橘、葡萄珠心组织与维管束系统无直接联系。 缺点：会有20—30%的变异，同时无毒苗苗期较长。 三、病毒植物的鉴定 （一）指示植物法 1 指示植物——指接种某种病毒后能迅速表现特有症状的植物。只能鉴定靠汁液传染的病毒。 2 指示植物法——利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法，也即为枯斑和空斑的测定法。 3 指示植物的要求（特点） 1）应根据不同的病毒选择适合的指示植物； 2）所选择的指示植物一年四季都容易栽培； 3）在较长的时期内还能保持对病毒的敏感性； 4）容易接种，而且在较广的范围内具有同样反应。 4 指示植物种类 1）接种后产生系统性症状，其病毒可扩展到植物非接种部位，通常没有局部病斑； 2） 只产生局部病斑，常由坏死、褪绿或环状病斑构成。 5 步骤 接种时从被鉴定植物取1～3g幼叶，加磷酸缓冲液（pH7.0）在研钵中研碎； 用两层纱布过滤，在滤液中加入少量的500～600目金钢砂摩擦指示植物的叶片，造成叶表受侵染； 清水冲洗叶面，接种后的指示植物应在防蚜虫温室中。接种后2～6天可见到症状出现。 （