第14章dna合成2011金陵学院.ppt

DNA的生物合成 金陵学院 2011 遗传信息的传递和表达 主要内容 DNA的复制 逆转录 DNA损伤修复 DNA的复制 Replication, self-replication 研究对象： 细菌：E.coli 病毒：virus 酵母：yeast 两个关键问题： DNA复制所需的时间； E.coli 5x106 bp 30min human 3x109 bp 8 hrs DNA复制的精确性； 错配几率为 1/109 一、DNA的半保留复制：semiconservative replication DNA分子中的每一条链都含有合成它的互补链所需的全部信息 实验证明： 1958年，Meselson和Stahl利用同位素（15N）和氯化铯密度梯度离心，首次证明了DNA的半保留复制； 二、DNA复制的起点： 复制起点（复制原点）---DNA分子上开始复制的特定位置。Origin, O 复制子---能够独立进行复制的基因组单位。Replicon 一个复制子只含有一个复制起点。 原核生物：单个复制子； 真核生物： 细胞器：单个复制子； 基因组：多个复制子； 三、DNA复制的方向： 原核生物（染色体、质粒）、真核生物细胞器：双链环状DNA，双向为主、对称为主 真核生物染色体： 双链线状DNA，双向对称 复制的特殊方式： 枯草杆菌：双向不等速； 质粒R6K； 双向不对称； 质粒ColE1：完全单向； 噬菌体Φx174：滚环复制； 线粒体DNA；D-环复制 四、DNA复制的速度： 原核生物：5X104bp/min E.coli 5X106bp，双向等速，单复制子 一般情况需40mins, 丰富培养基中形成多复制叉，20mins 真核生物：2000bp/min human 3X109bp，双向、多复制子 需6-8hrs 五、DNA复制的时间： 染色体DNA：S期 细胞器DNA：整个细胞周期 质粒DNA：随染色体复制或单独复制 病毒DNA：立即复制或整合到宿主染色体中 六、与DNA复制有关的酶、蛋白质： DNA聚合酶； DNA连接酶； 引发酶； 拓扑异构酶； 单链结合蛋白； …… DNA聚合酶： DNA polymerase/DNA pol DNA dependent/directed DNA polymerase DDDP DNA + dNTP ? DNA-dNMP + PPi 原核生物DNA pol： E.coli DNA 聚合酶 DNA pol I DNA pol II DNA pol III DNA pol IV DNA pol V DNA pol I 多功能酶 3’ to 5’ exonuclease activity 5’ to 3’ exonuclease activity 5’ to 3’ DNA polymerizing activity Klenow fragment: 蛋白水解酶有限水解产物： 大片段：75kd 聚合酶活性 3’→5’核酸外切酶活性 小片段：36kd 5’→3’核酸外切酶活性 Klenow fragment的结构 DNA复制的精确性 DNA pol I的选择作用 3’→5’核酸外切酶活性的校正作用 5’→3’核酸外切酶活性 DNA pol I 3’→5’核酸外切酶活性与5’→3’核酸外切酶活性的比较 A；作用于单链； B；作用于双链； A；作用方向，3’→5’ B；作用方向， 5’→3’ A；与聚合酶活性紧密结合，相互影响； B；与聚合酶活性无关，可同时进行； DNA pol I不是主要的复制酶！ DNA pol I的聚合反应速度为103base/min 原核生物实际的复制速度为105base/min 1969年，Delucia和Cairns分离得到的E.coli突变菌株polA- DNA pol I的进行性不高 DNA pol I的功能： DNA损伤修复； Nick translation； Gap fill-in； Short lengths of DNA synthesis DNA pol II 1970年分离得到； 聚合酶活性：2400base/min； 100分子/cell； 有3’→5’核酸外切酶活性， 没有5’→3’核酸外切酶活性； 在DNA repair 中起作用； DNA pol III 1971年分离； 多亚基； 聚合酶活性是DNA polI 的 50