负载HPV16L1抗原的DC疫苗的构建及免疫效果的研究.pdfVIP

中华实验和l临床病毒学杂志 2016 年 12 月第 30 卷第 6 期 Chinese J Exp Clin Virol , December 2016 ,Vol. 30 ,No. 6 .517. L1 elevated slowly , and eventually exceeded that of recombinant adenovirus group at the fifth week of post- immunizalion. As 10 humoral immunity , both DC-L1 and Adv-HPV16 L1 vaccines can induce specific humoral immune reponses , and with similar kinetics. Conclusion The DC- L1 vaccine was constructed successfully. The DC-L1 vaccine can induce high levels of HPV16 L1 specific humoral and cellular immune response. [ Key words] Dendritic cell; vaccine; Papillomavirus human; major capsid protein Fund program: National Hightech RD Program of China (863 Program) (2012AA02A404) TNF-α 购自美国 Peprotech 公司;淋巴细胞分离液 大量流行病学及分子生物学研究表明，高危型 人乳头瘤病毒( Human papillomavirus , HPV) 的持续 EZ-Sep ™ Mouse 、 EZ-CultureTM ELISPOT 专用无血 感染是多种上皮性恶性疾病，比如宫颈癌、食管癌、 清培养基、小鼠 IFN-γELISPOT 试剂盒购于达科为 乳腺癌、结肠癌、口腔癌、胃痛的主要病毒学病 生物技术有限公司;实验用 SPF 级别 C57BLl6 小鼠 因[1) 。一般认为 HPV L1在病毒基因组整合过程中 购自维通利华实验动物中心。 1.2 小鼠骨髓源 DC 前体细胞的分离培养及诱导 发生缺陷或基因丢失从而在肿瘤细胞中没有表达。 成熟颈部脱臼法处死6-8 周龄 C57BL/6 小鼠，无 然而，近来的免疫组化分析显示，在宫颈上皮内瘤变 ( Cervical intraepithelial neoplasia , CIN) 1 期、 E 期以 菌环境下剥离小鼠双侧股骨和腔骨，剪掉两端骨髓， 2 ml 注射器吸取无血清 RPMI1 640 培养液从骨两端 及3 期的患者中，Ll蛋白的检出率分别为 83.53 1}岛、 4 1. 810岛和 3.13% [2) 0 Bellone 等问的研究显示，在 反复冲洗直至骨变白。 200 目滤网过滤细胞悬液， 加入红细胞裂解液去除红细胞，RPMI1 640 洗涤两 宫颈组织速冻标本中 E6 及Ll蛋白的表达水平并 次，用 1 ml RPMI1 640 培养液重悬骨髓细胞，调整细 无显著差异。本实验室的前期研究显示，在食管癌 胞浓度至1. 0 X 106 Iml 后接种至 100 mm 培养 原代细胞以及癌细胞株内均能检测到 HPVL