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·140 · Journal of Ningxia Medical College 2008 4
:1005-8486(2008)02-0140-03
··
HSP70、
于晶晶, 于辛酉, 王娅娜, 师志云, 马 锐, 卜 阳, 罗永云, 赵 巍
(, 750004)
:目的 (Echinococcus granulosus, Eg )70(Heat shock protein, HSP70)
、。方法 HSP70/pGEM-T HSP70
, pET-28a, E.coli BL (E3)plysS , His-band
21
, S SWestern blot 。结果 Eg.HSP70/ pET-28a/
E.coli BL , 14k a Eg .HSP70
21
。结论 。
:;HSP70;;;
+
:R383.3 3 :A
(Echinococcosis) , BamHI NotI 。
(Echinococcus granulosus,Eg .) 1 。
, 。 。
,
。,
[1]
。
Eg .HSP70/ pET-28a/E.coli BL ,
21
。
1
[2]
1.1 、 HSP70/pGEMT 、
[3]
, E.coli BL (E3)plysS、pET-28a、
21
His-bindNovagen 。
、、IgG-HRP、
。BamHⅠ、NotⅠ
。T4 NA Lingase IPTG
Promega 。
1.2
1.2.1 Eg .HSP70/pET-28a 1
BamHⅠ、NotⅠEg .HSP70/pGEMT 1.2.2
pET-28a , (50μg/mL)3mL YT , 37℃, 220r/min
pET-28aT4 , 4℃。 , 1 ∶50 50mL
E.coli BL (E3)plysS,
21 O 600=0.6 , 1mol/L IPTG 0.5mmol/L,
(50μg/mL)YT , 37 ℃。
28、30 37℃, IPTG 、
。 4000r/min
:2007-09-17 10min, , ,
:; S S。
(NZ0540) 1.2.3 Eg .HSP70/6His
:(1981-), , , , 2+
Ni His-bind Eg .HSP70/
。 6His 。 100μL
:, , , 。
1.5mL EP , 、1×charge buffer、1×binding
E-mail:Zhaow @nxmc.edu.cn
buffer , ,
2 , .HSP70
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