放线菌的杂交育种.pptVIP

微生物杂交育种 微生物杂交育种的一般程序：选择原始亲本 诱变筛选直接亲本 直接亲本之间亲和力的鉴定 杂交 分离到基本培养基或选择性培养基 筛选重组体 重组体分析鉴定 放线菌的杂交育种 玻璃纸法平板杂交法 放线菌的杂交育种 杂交技术【一】 ——玻璃纸法 原理介绍： 用于杂交实验的两个直接亲本都携带营养缺陷型标记。另外，其中一个亲本带某药物的抗性标记，而另一亲本则是对同种药物具有敏感性。 eg： A亲本带met-和str B亲本带his-和ura-，但对str敏感。 所用培养基：完全培养基 选择培养基（即在基本培养基中加入同一种药物的补充培养基）  首先是将两亲本孢子接种到覆盖于固体完全培养基上的玻璃纸表面 所谓异核体：即放线菌杂交过程的两直接亲本不发生染色体交换，两亲本的染色体独立存在在同一细胞内。菌落表型是原养型。基因型分别与亲本之一相同，无重组体出现，没有发生遗传信息交换。 玻璃纸平板杂交的具体方法： ①制孢子悬浮液 ②混合液接种到完全培养基上的半透性玻璃纸表面 ③移取长有基质菌丝的玻璃纸到添加有某药物的补充培养基上 ④分离子的检出和鉴别 杂交技术【二】 ——平板杂交法  该方法适合于大量菌落与一个共同实验菌株配对测定致育能力 优点：适于在短时间内进行大量配对菌株的杂交。 具体方法：①将多株亲本A菌株的菌落以点种法分别接种到各个完全培养基平板上，培养备用。 ②将一株共同配对的亲本菌株B产生的孢子作成孢子悬液，取一定量加入到另一个有限培养基琼脂平板上，培养备用。 ③待A孢子成熟后，采用影印法复印到B菌株平板上培养。形成部分结合子。 ④两亲本染色体进行一次单交换而形成杂合系。进一步培养、繁殖、杂合系形成孢子，采用影印法将杂合系孢子复印到各种选择性培养基平板上，从而从中检出重组体分离子。重组体。  有限培养基：是专供异核体菌株生长使用的培养基。通常在基本培养基活蒸馏水中加入适量的完全培养基，加入的量只限两直接亲本菌株稍许生长，以提供相互接触、吻合的菌丝体需要。 * * 将玻璃纸转移到含有某药物的补充培养基上继续培养。 一定时间培养 在该补充培养基上有此几类菌不能生长： 异核体菌落 B亲本 A亲本 ①因为B亲本对该药物有敏感性，则在异核体中带有对该药物敏感的等位基因。 ②B对该药物敏感，且所在的培养基中又缺乏所需his，ura营养成分。 ③培养基上缺乏所需要的met成分 *