花苜蓿内生放线菌多样性及群落结构.pdfVIP

113-119 草业学报 第 22 卷第5 期 Vo l. 22 ,No. 5 ACT A PRAT ACULTURAE SINICA 2013 年 10 月 花茵宿内生放线菌多样性及群落结构 张波1 ，李小林1 ， 2 ，江华明1 ， 3 ，张小平1 祷 (1.四川农业大学资源环境学院，囚川成都 611130; 2. 四川省农业科学院土壤肥料研究所，四川成都 610066; 3. 四川职业技术学院建筑与环境工程系，四川遂宁 629000) 摘要:为了了解药用植物花首稽内生放线菌的多样性和群落结构，将采自四川省甘孜地区的药用植物花茵稽进行 严格的表面消毒灭菌后，运用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis , DGGE) 技术对其根茎叶 花等样品的内生放线菌进行分析。结果表明，花酋稽不同组织中内生放线菌多样性和群落结构存在明显差异。其 内生放线菌的多样性指数(H) 和丰富度(5) 均是花根茎叶，而均匀度(E ) 则是叶根茎花。不同组织 H 样品之间的放线菌群落结构相似性差异明显，其中茎与叶的相似性最高，根与叶之间相似性最低，其他组织之间相 似性均很低。 DGGE 条带回收测序结果显示，大部分克隆条带属于链霉菌属(5treptomyces) ， 但仍有超过 43% 的 条带属于稀有放线菌，且主条带 A23 和共有条带 A12 属于稀有放线菌，说明部分稀有放线菌在花百宿样品内是优 势放线菌。该研究表明了花盲稽根茎叶花组织的内生放线菌存在丰富的多样性，且不同组织内生放线菌多样性存 在明显差异，其中花组织多样性最丰富。说明甘孜地区的药用植物花首稽可作为一种较理想的分离内生放线菌的 植物资源。 关键词:花首宿P 放线菌;多样性;群落结构;DGGE 中图分类号:S551 +. 7;S432. 4+ 3 文献标识码:A 文章编号:1004-5759(2013)05-0113-07 DOI:10.11686/cyx 花盲宿(Medicago ruthenica) 不仅是蛋白质丰富的豆科牧草[1.飞且有一定的药用价值，内服其煎汤能治肺 热咳嗽、赤俐，而外用熬膏涂则能消炎止血。四川省甘孜地区地域辽阔，以其独特的地理环境而存在明显的资源 优势。该地区具有丰富的药材资源，且质地优良，花盲宿就是其中分布较普遍的一种。尽管花百宿已被广泛应用 于医药，但方式单→，并没普遍通过深入研究花茵宿药用机理对其进行应用，这就在一定程度上阻碍了其长远发 展。随着人们探索微生物步伐的逐渐前行，从微观视角研究并解决一些问题变得行之有效问。 放线菌能产生许多重要的抗生素，因此目前对于内生放线菌的研究很多问。通过可培养的方法研究内生放 线菌的多样性，简单直接，还可获取一些放线菌资源。但由于环境中绝大部分放线菌难以通过传统的培养方式获 得，这样就很难准确评估这一微生物类群的多样性，所以越来越多的研究者将分子生物学技术应用于不同生境下 放线菌多样性的研究时，其中变性梯度凝胶电泳(DGGE) 技术就是一种有力的于段。医学领域最早应用这种技 术町，随后 Muyzer 等[7J 在群落结构分析方面也开始运用 DGGE 技术。宋亚娜等问利用 DGGE 技术研究了不同 间作和轮作种植体系对作物根际细菌和真菌群落结构的影响表明，不同的种植体系对微生物群落有明显的影响， 并且存在差异。王海英等[9J 采用该技术对水井坊害底泥微生物群落结构进行了分析，揭示了不同部位的害底泥 的微生物群落结构具有一定的差异性。目前采用 DGGE 技术研究的领域很多，但对于植物内生放线菌多样性的 研究仍主要采用传统的培养技术，运用 DGGE 技术研究植物不同组织内生放线菌群落多样性鲜见报道。本研究 拟通过 PCR-DGGE 技术对花盲稽不同组织内生放线菌群落结构和多样性进行研究，以期了解花百宿内生放线