培土生金法对肺脾两虚型慢阻肺大鼠肺功能影响.docVIP

培土生金法对肺脾两虚型慢阻肺大鼠肺功能影响 　　[摘要] 目的 探讨培土生金法对肺脾两虚型COPD大鼠肺功能影响。方法 于2016年6―7月，在甘肃中医学院动物实验中心开展研究。采用每日被动烟熏、气管内两次注射脂多糖及灌服番泻叶的方法，复制大鼠肺脾两虚型COPD模型；实验随机分为正常组、模型组及治疗组，在第28天做大鼠肺功能测定，光镜观察大鼠肺组织病理变化。结果 与正常组比较，模型组MV（98.99±0.74）mL、PIF（8.11±0.21）mL/s、PEF（8.55±0.32）mL/s均明显降低；MV、PEF（P 　　1.1 动物 3月龄清洁级Wistar大鼠共30只，雌雄各半，体质量（200±20）g，由甘肃中医学院动物实验中心提供，随机分为3组：即正常组，模型组，治疗组，每组各10只 1.2 受试药物 番泻叶浸液：番泻叶浸泡12 h，绞汁过滤，装入烧杯，浓缩至含生药1 g/mL，4 ℃冰箱保存；参苓白术散：由人参、白术、茯苓、甘草、山药、莲子、白扁豆、薏苡仁、砂仁、桔梗等药物组成，实验选用免煎剂。均购于甘肃中医药大学附属医院门诊中药房 1.3 主要试剂及仪器 脂多糖（批号 L-2880）；兰州牌香烟（焦油量14 mg 烟气烟碱量1.1 mg，烟气一氧化碳量 14 mg）；生物信号采集系统 2 方法 2.1 造模方法 采用宋一平等[2]研究方法加以改良建立大鼠COPD模型。第1、14天，经口气管滴注LPS：大鼠麻醉后，头部自由垂落于鼠板边缘，四肢宽松固定于鼠板。暴露口腔，以卵圆钳向前外侧牵拉舌头。将喉镜插入大鼠口中压紧舌根防止后坠，同时向上提拉下颌，灯光下可见大鼠喉部有一透亮区，于吸气相将气管插管插入气道。同时将气管套管拔出，将1 mL针管内先抽入相应量溶于生理盐水的LPS（1 mg/mL），于大鼠吸气瞬间迅速推注LPS（大鼠用量0.1 mg）。再向气管内迅速推注0.5～1 mL气体1～2次以使LPS充分分布于肺组织内。拔出针管，轻拍大鼠胸背部，并轻抖动，使药物均匀分布于肺内。 第 2～28天（滴注LPS当天不烟熏，正常组呼吸空气），每日上午将大鼠放于染毒箱内，持续烟熏30 min后，置于鼠笼常规饲养。自造模第7天起在熏??前30 min给予浓度1 g/mL冰冷番泻叶浸液，按1 mL/100 g体重的剂量，连续灌胃至28 d造模结束 2.2 给药方法 实验药物用量均按体表面积比率（D2=D1×0.018×5）配制药液，临床等效剂量为实验中剂量。注 D2：大鼠（200 g）的临床等效剂量，D1：成人（70 kg）日用量。模型复制成功后进行药物干预，按1 mL/100 g体重的剂量灌胃：治疗组给予参苓白术散灌胃治疗，正常组给予等容量生理盐水灌胃。每日下午 1 次 ，连续灌胃干预至28 d 2.3 实验观察与指标检查 2.3.1 肺功能测定 用10%水合氯醛（国药准字（3 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，待其完全麻醉，将大鼠固定于手术台上，大鼠喉镜经口气管插管方法，插入Y型气管插管并固定，将插管一端连接生物信号采集系统传感器，自动描记呼吸曲线，测定大鼠每分钟通气量（MV）、呼气峰流量（PEF）及吸气峰流量（PIF）等指标 2.3.2 标本采集与处理 肺功能测定完毕，取血后处死大鼠，开胸分离肺脏，取左肺上叶，肉眼观察后，用生理盐水拭去肺表面血渍置于4%多聚甲醛溶液中外固定。酒精梯度脱水，浸蜡，包埋，切片，HE染色，于光镜下观察肺组织形态学改变 2.4 统计方法 实验数据采用SPSS 20.0统计学软件进行处理，计量资料符合正态性分布，采用（x±s）表示，行独立样本t检验，P 1