黑曲霉M1菌株木聚糖酶复合酶的固态发酵条件及其酶学性质研究.pdfVIP

第 29卷 第 4期 陈红歌等：黑曲霉M。菌株木聚糖酶复合酶的固态发酵条件及其酶学性质研究 黑曲霉 M。菌株木聚糖酶复合酶的固态 发酵条件及其酶学性质研究 陈红歌 郭夏丽 窦会娟 贾新成 (河南农业大学生物工程学院，郑州，450002) 摘 要 以玉米芯和麸皮 (7：3)为碳源，(NI-h)2S04(2％)为氮源，3012培养 72h，发酵 曲用蒸馏水 30℃浸提 1h，得到 1，4一木聚糖酶活力高， 木糖苷酶活力低 的粗酶液。 1，4一木聚糖酶和 木糖 苷酶的最适作用温度分别为 50℃和 60℃，最适作用 pH分别为4．8和 4．0，B一1，4-木聚糖酶在 pH5．0～10．6范围内稳定，木糖苷酶在 pH3．0～3．0范围内稳定。 木糖苷酶的热稳定性 比 1， 4一木聚糖酶高。 关键词 1，4一木聚糖酶，木糖苷酶，固态发酵 通常情况下，木聚糖酶是一种复合酶，包 m(麸 皮)：m (水 )= 1：1，添加 1％ 括8—1，4-木聚糖酶 (1，4-6一D—xylanxylanohy— (NI-h)2S04。 drolase，EC3．2．1．8)和 木糖苷酶 (1，4一D— 1．3 主要试剂与仪器 xylanxylohydrolase，EC3．2．1．37)。前者又 桦木木聚糖、对硝基酚一8一木糖苷均 为 称内切木聚糖酶。它从主链内部作用于木糖 Sigma公司产 品：UV755B分光光度计为上 苷键，将大分子木聚糖降解成寡聚木糖、木二 海仪器厂产品。 糖及少量的木糖，而后者作用于木寡糖或木 1．4 试验方法 二糖 的末端，释放 出木糖[，引。 目前这 2种 黑 曲霉的斜面在 30℃条件下培养至长 酶的酶学性质都 已得到了研究[3--6J。用酶 满孢子 ；固体培养为 250mL三角瓶装入 30g 法生产低聚木糖，必须使酶系中8—1，4一木聚 湿料，灭菌，接入 2环孢子，摇匀，置于 30℃ 糖酶活力高，8一木糖苷酶活力低。本实验筛 条件下培养3d。 选到 了一株 6-1，4一木聚糖酶活力高、8一木糖 1．5 酶活力测定方法 苷酶活力低的菌株，以此为出发菌株，研究其 1．5．1 粗酶液制备 发酵条件和酶学性质，旨在为低聚木糖的生 向每瓶新鲜 曲中加入 100mL蒸馏水， 产提供依据。 30℃浸提 1h，过滤液即为粗酶液。 1．5．2 木聚糖酶活力测定 [] 1 材料与方法 0．1mL稀释酶液加 0．1mL1％木聚糖 1．1 菌 种 溶液 (pH4．6)，50*(3酶解 15min，用 DNS法 黑曲霉 (Aspergillusniger)M1为河南农 测还原糖 (以木糖计)。在上述条件下，每分 业大学微生物教研室保藏菌种。 钟产生 1ttmol木糖所需的酶量为 1个酶活 1．2 培养基 力单位 (U)。 1．2．1 斜面培养基 1．5．3 8一木糖苷酶活力测定 马铃薯培养基 (PDA)。 取 100 L2mmol／L对硝基酚一p一木糖苷 1．2．2 固体初筛培养基 底物，加入 0．2mol／L、pH4．6醋酸缓冲液 50 第一作者：硕士，副教授 。 收稿 日期：2002