第二十二章常用分子生物学技术的原理.pptVIP

一、酵母双杂交技术的基本原理 目 录 * ?二、酵母双杂交系统的应用 （一）分析已知蛋白之间的相互作用 （二）对蛋白质功能域的分析 （三）分析未知蛋白相互作用 （四）绘制蛋白质相互作用系统图谱 （五）在药物设计中的应用 * 实时PCR技术原理 目 录 * 第 三 节 核 酸 序 列 分 析Nucleic Acid Sequence Analysis * 核酸序列分析的基本原理 化学裂解法 (Maxam-Gillbert法) DNA链的末端合成终止法 (sanger法) * 一、化学裂解法(Maxam-Gillbert法) 基本原理 基于某些化学试剂可以使DNA链在1个或2个碱基处发生专一性断裂的特性，精确地控制反应强度，使一个断裂点仅存在于少数分子中，不同分子在不同位点断裂，从而获得一系列大小不同的DNA片段，将这些片段经电泳分离。 分析前，用同位素标记DNA的5′末端，经放射自显影即可在X胶片上读出DNA链的序列。 * 二、DNA链末端合成终止法 * 目 录 * 三、DNA自动测序 采用荧光替代放射性核素标记是实现DNA序列分析自动化的基础。用不同荧光分子标记四种双脱氧核苷酸，然后进行Sanger测序反应，反应产物经电泳（平板电泳或毛细管电泳）分离后，通过四种激光激发不同大小DNA片段上的荧光分子使之发射出四种不同波长荧光，检测器采集荧光信号，并依此确定DNA碱基