第二张 基因工程制药 目的基因.pptVIP

* * * 四、测序策略 确证性测序 次级克隆DNA的插入方向，定点突变、删切 产物的鉴定、待表达基因阅读框架的确认等 未知序列的测定 确定一个未知DNA序列的准确长度和核甘酸 排列顺序 * 大片段未知序列的测定策略 随机克隆法（先水解再亚克隆） 限制性酶切片段亚克隆法 互套缺失法（定向连续次级克隆） * 复习思考题 简述双脱氧末端终止法测序的原理。 * （2）cDNA与载体相连 各cDNA各自与一个载体在T4连接酶 作用下以粘末端互相连接，即为重组DNA 分子。 * （3）导入宿主细胞 重组体在一定条件下导入宿主细胞培 养或保存。 宿主细胞必须是来自一个细胞的克隆 体，以保证它们的遗传性状相同。 * 4.筛选目的基因 核酸杂交法： cDNA克隆（菌斑或噬菌斑） 硝酸纤维素膜 杂交（DNA探针） 显影定位 挑选 培养扩增 纯化 * * * 2 3 * 二、构建基因组文库 1. 分离纯化基因组DNA 条件应温和，以保证得到较长的DNA链 2. DNA片段与载体连接 基因组DNA 酶水解 具一定长度的片段 （粘性末端）