微生物生长与调节1.ppt

* 微生物的生长与调节郭晓燕 式中?max为最大比生长速率；S是培养基中限制性营养物质的浓度； KS为饱和常数 KS为微生物以最大速度的一半的速度生长时，所要求的营养物质浓度，即? = ?max/2时，KS = S。 Monod公式只适用于单个限制性营养物质的情况。 常见的营养物质的KS值很小，当 S?10 KS时，? 接近于 ?max ，比生长速率不再明显受营养物质浓度变化的影响 * 微生物的生长与调节郭晓燕 lg 细胞数或产物浓度 时间 细胞 产物 I型 II型 微生物生长与代谢产物形成的关系 微生物发酵形成产物的过程与微生物细胞生长的过程并不总是一致的。一般认为： 初级代谢是给予生物能量和生成中间产物的过程，初级代谢产物的形成往往与微生物细胞的形成过程同步，微生物生长的稳定期是这些产物的最佳收获时机； 次级代谢产物与微生物的生存、生长和繁殖无关。次级代谢产物的形成往往与微生物细胞的形成过程不同步。在分批培养中，它们的形成高峰往往在微生物生长稳定期的后期或衰亡期。 * 微生物的生长与调节郭晓燕 1.1.2.4丝状微生物的群体生长 丝状微生物的纯培养采用孢子接种，在液体培养基中震荡培养或深层通气加搅拌培养，菌丝体通过断裂繁殖不形成产孢结构。可以用菌丝干重作为衡量生长的指标，即以时间为横坐标，以菌丝干重为纵坐标，绘制生长曲线。 可分为三个阶段： 1、生长停滞期 2、迅速生长期 3、衰退期 * 微生物的生长与调节郭晓燕 1、生长停滞期: 造成生长停滞的原因一是孢子萌发前真正的停滞状态，另一种是生长已经开始，但还无法测定。 2、迅速生长期:菌丝体干重迅速增加，其立方根与时间呈直线关系，菌丝干重不以几何级数增加，没有对数生长期。生长主要表现在菌丝尖端的伸长和出现分支、断裂等，此时期的菌体呼吸强度达到高峰，有的开始积累代谢产物。 3、衰退期:菌丝体干重下降，到一定时期不再变化。大多数次级代谢产物在此期合成，大多数细胞都出现大的空泡。有些菌丝体还会发生自溶菌丝体，这与菌种和培养条件有关。 丝状微生物的群体生长 * 微生物的生长与调节郭晓燕 单位时间里微生物数量或生物量（Biomass）的变化 微生物生长： 微生物生长的测定： 个体计数 群体重量测定 群体生理指标测定 评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响； 评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀死)作用的效果； 客观地反映微生物生长的规律； 1.1.2 微生物生长的测定方法 * 微生物的生长与调节郭晓燕 1.1.2.1 以数量变化对微生物生长情况进行测定 通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长情况 或样品中所含微生物个体的数量（细菌、孢子、酵母菌） (1)、培养平板计数法 * 微生物的生长与调节郭晓燕 采用培养平板计数法要求操作熟练 、准确，否则难以得到正确的结果： 样品充分混匀； 每支移液管及涂布棒只能接触一个 稀释度的菌液； 同一稀释度三个以上重复,取平均值； 每个平板上的菌落数目合适，便于 准确计数； 一个菌落可能是多个细胞一起形成，所以在科研中一般用 菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示，而 不是直接表示为细胞数。 * 微生物的生长与调节郭晓燕 (2)膜过滤培养法 当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样 品通过膜过滤器，然后将将膜转到相应的培养基上进行培养，对形 成的菌落进行统计。 微生物在过滤膜表面情况 * 微生物的生长与调节郭晓燕 * 微生物的生长与调节郭晓燕 (3) The most probable number method（液体稀释法） 主要适用于只能进行液体培养的微生 物，或采用液体鉴别培养基进行直接 鉴定并计数的微生物。 对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算取三个连续的稀释度 平行接种多支试管，对这些平行试管的微生物生长情况进行统 计，长菌的为阳性，未长菌的为阴性，然后根据数学统计计算 出样品中的微生物数目。 * 微生物的生长与调节郭晓燕 (4)显微镜直接计数法 1）常规方法： 采用细菌计数板或血球计数板，在显微镜下对微生物数量进行直接 计数（计算一定容积里样品中微生物的数量）。 缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； * 微生物的生长与调节郭晓燕 2）其它方法： 将已知颗粒浓度的样品（例如血液）与待测细胞细胞浓度的样品混匀 后在显微镜下根据二者之间的比例直接推算待测微生物细胞浓度。 比例计数： 过滤计数： 当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品 通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显 微镜下计算膜上(或一定面积中)的细菌数； 活菌计数： 采用特定的染色技术