抗体抗cd3 抗cd20 的构建和表达.pdfVIP

熊冬生等　微型双功能抗体抗 CD3/ 抗 CD20 的构建和表达　第7 期 3·39 · ·分子与细胞免疫学· 微型双功能抗体抗 CD3/ 抗 CD20 的构建和表达① ② 熊冬生 　许元富 　杨纯正 　彭 　晖 　邵晓枫 　赖增祖 　范冬梅 　杨 　铭 　朱祯平 ( 中国医学科学院中国协和医科大学血液研究所实验血液学国家重点实验室 ,天津 300020) 　　中国图书分类号 　R39211 　　文献标识码 　A 　　文章编号 　1000484X( 2001) 摘　要 　目的 :构建和表达抗 CD3/ 抗 CD20 微型双功能抗体 ,并测定该微型双功能抗体的生物学活性。方法 :采用 PCR 和 overlap PCR 方法构建抗 CD3/ 抗 CD20 微型双功能抗体 ,并用双脱氧终止法测定 DNA 序列 ;采用亲和层析法纯化该产物 ,并 用 Western blot 和分子排阻层析鉴定纯化产物 ;采用 FACS 法和玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果 :DNA 序列测定结果表明 :抗 CD3/ 抗 CD20 微型双功能抗体已构建成功 ,表达可溶性产物的产量达 1 mg/ ml 以上,纯化产物中二聚体 ( + ) ( + ) 的比例达90 % ,具有与Jurkat CD3 和 Daudi 细胞 CD20 结合的活性 ,且能同时与 Jurkat 和 Daudi 细胞结合形成玫瑰花环。 结论 :利用 Diabody 形式 ,首次成功地构建了抗 CD3/ 抗 CD20 微型双功能抗体 ,并获得较高表达 ,表达产物具有与相应 2 个靶抗 原结合的活性。 关键词 　单克隆抗体 　CD3 　CD20 　基因工程抗体 　双功能抗体 Study on the construction and expression of antiCD3/ antiCD20 Diabody XIONG DongSheng , XU YuanFu , YANG ChunZheng et al . The State Key Laboratory of Experimental Hematology , In stitute of Hematology , CAMS PUMC , Tianjin 300020 Abstract 　Objective :To construct and express antiCD3/ antiCD20 Diabody and identify its biological activity. Methods :PCR and over lap PCR were used to construct antiCD3/ antiCD20 Diabody. DNA sequence was analyzed by the Terminus of Dideoxy Nucleotide. The product was purified by affinity chromatography and analyzed by both the detection of Western blot and size exclusion chromatography ;its antigenbind ing activity was examined by FACS and rosetting assay. Results :The data of DNA sequence showed that the antiCD3/ antiCD20 Diabody was ( ) ( ) corrected. The Diabody was recovered in high yield up to 1 mg/ ml after Etaq purification and predominantly 90 % as a dimer. The Diabody ( + ) (