鹅生长激素基因的克隆、原核表达及其重组蛋白质的离子交换纯化.pdfVIP

江苏农业学报 (Jiangsu ofAgr．Sci．)，2014，30(6)：1387～1391 http：／／www．JSnYxb．con 李 辉 ，陈 蓉，应诗家，等．鹅生长激素基因的克隆、原核表达及其重组蛋白质的离子交换纯化[J]．江苏农业学报，2014，30 (6)：1387·1391． doi：10．3969／j．issn．1000-4440．2014．06．032 鹅生长激素基 因的克隆、原核表达及其重组蛋 白质的 离子交换纯化 李 辉， 陈 蓉， 应诗家， 施振旦，赵 伟 (江苏省农业科学院畜牧研究所，江苏 南京 210017) 摘要：为了克隆鹅生长激素基因并表达其重组蛋白质，采集生长期鹅垂体组织，并利用 TRIzol快速提取的总 RNA为模板，反转录为cDNA。根据鹅生长激素基因编码的成熟肽序列(GenBank号：AY149895．2)设计 1对引物，分 别在上、下游引物的5端引入NheI和HindIII酶切位点。经反转录扩增获得鹅生长激素基因的编码的成熟肽全序 列。通过双酶切和连接将鹅生长激素编码区插入原核表达载体 pRSET-A的NheI和HindIII位点之间，构建重组表 达质粒pRSET—gGH并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)。转化的菌株经 IPTG诱导后表达重组鹅生长激素蛋白质， 分子量约为2．93x10。经过DEAE-650M弱阴离子交换树脂纯化获得较高纯度的重组鹅生长激素蛋白质。 关键词： 鹅；生长激素 ；原核表达；阴离子交换 中图分类号： $835．5 文献标识码 ： A 文章编号： 1000~440(2014)06—1387-05 Cloningandprokaryoticexpressionofgoosegrowthhormonegeneandre- combinantprotein anion-exchangepurification LIHui， CHENRong， YINGShi-jia， SHIZhen—dan， ZHAOWei (InstituteofAnimalScience，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences，Nanjng210014，China) Abstract： TotalRNA ofgoosegrowthhormonegeneextractedfrom goosepituitarytissuewithTRIzolreagentwere usedastemplateforreversetranscriptionofthefirststrandcDNA andapairofprimerswasdesignedbasedonthepublished goosergowthhormonegenesequencefragment(GenBankNo．AY149895．2)，inwhich，tworestrictionenzymesitesNheI and II1wereintroducedintothe5 endofbothupstream anddownstrema primersrespectively．Goosergowthhomr one genecodingsequencewasamplifiedbyPCR，andtheamplifiedmaturepeptidesequencewasinsertedintotheNheIand HindIIIsitesoftheexpressionvectorpRSET--A togeneratetherecombinantexpressionplasmidpRSET--gGH which was transfomredintoEscherichiacoliBL21(DE3)afterwards．ThetransfomredbacteriumwasinducedwithIPTGtoexpressthe recombinantproteinwithamolecularmassof2．93x10 ．Thehighpurityrecombinantgoosegrowthhomr onewasachieved usingDEAE-650M weakanionexchangeresin． Keywords： goose；growthhomr one；prokaryoticexpression；anionex