菜花、肝脏DNA的提取和琼脂糖凝胶检测.pptVIP

菜花、肝脏DNA的提取及琼脂糖凝胶检测 一. 实验目的 学习DNA提取的原理及方法。 掌握琼脂糖凝胶电泳的操作方法。 运用琼脂糖凝胶电泳检测DNA。 二 .实验原理 1．核酸分离提取的原则 1）应保证核酸一级结构的完整性 2）排除其他分子的污染 A． 核酸样品中不应存在对其有抑制作用的有机溶 剂和过高浓度的金属离子 B．其他生物大分子如：蛋白质，多糖和脂类分子 的污染应降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染（如：提取DNA分子 应除去RNA；反之亦然） 2. 核酸提取的步骤 1）破碎细胞（材料不同，方法不同） 匀浆器，捣碎器，溶菌酶消化，碱裂解等。 2） 除杂质，提DNA 杂质：蛋白，多糖，脂类，DNase, RNase A. DNase的抑制 DNase需Mg2+,Ca2+激活，所以提取时加EDTA或EDTA钠盐。（螯合金属离子） 加去垢剂或变性剂（SDS），可使DNase变性失活 B.?除RNA 酶法：加RNase 四. 实验步骤 （一）DNA提取 1，称取 肝脏或者菜花5g,用水清洗后，加入石英砂(半匙)研磨,再加入14ml 0.14M NaCl-0.15M EDTA溶液，继续研磨至浆状，分装两管，平衡后对角