液相色谱Z值对溶菌酶分子构象变化的定量表征.pdfVIP

Vol.24 高 等 学 校 化 学 学 报 No.7 年 月 2 0 0 3 7 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 1207*1209 [研究简报] 液相色谱 值对溶菌酶分子构象变化的定量表征 Z 王 彦 李 敏 龚波林 耿信笃, , , (西北大学现代分离研究所 分离科学陕西省重点实验室 西安, , 710069) 关键词 溶菌酶 液相色谱 变性 构象 表征; ; ; ; 中图分类号 O658 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2003)07-1207-03 目前 研究蛋白分子的构象变化用得最多的是光谱法 如荧光光谱 圆二色谱和核磁共振谱等, , , [1]. [2] 由于蛋白质分子构象变化与其在色谱中的保留行为直接相关 所以色谱法也成为研究蛋白质分子构, [3] 象变化的一种新方法 此外 计量置换理论中的 值也已被成功地用于表征生物大分子的构象变. , Z [4] 化 用 值研究蛋白质分子构象变化的优点是可以使用不纯的样品 这是因为在测定 值的过程中. , Z Z 会与其它组分相分离 使用 值还会对蛋白分子构象变化进行定量表征. [5,6]. 本文以溶菌酶( )为目 Z Lys 标蛋白 用色谱法 反相液相色谱 和弱阳离子交换色谱 系统地研究了 在不同变性 , [ (RPLC) (WCX)] Lys (胍变非还原 脲变非还原 胍变还原和脲变还原 环境中因疏水性及电荷分布的不同对, , ) Lys 分子构象 变化的影响, 并用 值进行了定量表征. Z 1 实验部分 1. 1 试剂与材料 溶菌酶(Lysozyme Lys, , 美国Sigma 公司 ), DTT(华美生物工程公司 美国, 公司进口分装 乙腈 色谱纯 美国 公司 氯化钠 分析纯 沈阳化学试剂厂 Amresco ), (ACN, , Tedia ), ( , ), (分析纯 北京益利精细化学品有限公司 脲 分析纯 成都金山化工试剂厂 盐酸胍 Tris , ), (Urea, , ), (GuHCl, 分析纯 中国医药集团上海化学试剂公司, ), EDTA(分析纯 天津劢特吉尔环保技术研究, 所). 仪器 高效液相色谱仪 日本岛津公司 包括两台 -10 泵