重组同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的表达纯化及表征.pdfVIP

·4· ofMedicineV01．34 2015 Herald Suppl．August 重组同型半胱氨酸仪，^y一裂解酶的表达纯化及表征 王利群1，孙培培1，曹利民2，奚学志1，王炜煜3 (1．常州大学制药与生命科学学院，常州213164；2．常州英赞美科生物科技有限公司，常州213022； 3．华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科，武汉430030) 摘要目的研究以包涵体形式表达的重组同型半胱氨酸d，3-裂解酶的表达、纯化，对其活性进行检测并对其 U· 白活性，并对该酶进行了表征。结果重组蛋白在大肠埃希茵中可以高效表达，产量为204mg·L一，比活约206 mg～。相对分子质量为45200。重组酶的最适反应温度为35℃，酶活性稳定的温度范围为20一35℃。重组酶的最适反 h酶稳定性最高。结论成功克隆和表达了rHCYase蛋白，并得到高 应pH为7．5，4℃下在pH7．5的缓冲溶液中保温5 产高酶活的可溶性蛋白，对同型半胱氨酸检测试剂的开发有一定的潜在应用价值。 关键词 同型半胱氨酸d，3-裂解酶；表达纯化；表征 中图分类号R977．3 文献标识码A 文章编号1004-0781(2015)08增43004-04 反应，生成理．丁酮酸，甲硫醇和氨，能有效降低甲硫氨酸浓度。 同型半胱氨酸o【，’一裂解酶(homocysteine伐，’．1yases， HCYase，EC4．4．1．11)是一种磷酸吡哆醛(pyridoxalphosphate，与传统化疗方法相比，HCYase作为新型抗肿瘤药物具有肿瘤 特异性高、毒副作用小等特点，显示出巨大的临床应用潜力。 PLP)依赖酶，又称L-甲硫氨酸_y．裂解酶，属于1蛋白家族。能 催化L-甲硫氨酸及同型半胱氨酸的a，1一消除反应及’．取代反 应，催化己．半胱氨酸及其衍生物的俚，13消除反应及B一取代反 样硬化有关的观点以来，国内外学者围绕这一问题展开了大量 应。催化此类反应的酶最早在大肠埃希菌中发现，命名为甲硫 的研究。近年来研究确认，高同型半胱氨酸血症与作为人类第 一杀手的动脉粥样硬化、高血压、心肌梗死等多种心血管疾病 氨酸裂解酶(methioninelyase)…，如今将它命名为甲硫氨酸1- 裂解酶并在多种生物中发现，如恶臭假单胞杆菌。21、阴道毛滴 的发生有密切的联系，是心血管疾病的一个独立危险因素。血 虫J、气单胞菌属Ho、拟南芥¨1等。虽然来源不同，HCYase的浆中Hey浓度每降低3lxmol·L～，缺血性心脏病发生率降低 000～ 11％，卒中发生率降低19％l7|。同型半胱氨酸在临床上可作为 相对分子质量大都在约170000，由4个分子量大小在40 48 心血管疾病，尤其是冠状动脉粥样硬化症和心肌梗死的重要危 000的同型亚基组成；具有磷酸吡哆醛依赖性，蛋白的紫外吸 收除了在280nnl有吸收峰外还会在420nm处出现一个与磷酸 险指标，其浓度的升高程度与疾病的危险性成正比。因此，研 吡哆醛结合的特征峰。 究一种简单、快速、灵敏的检测方法具有重要意义。HCY舾e可 HCYase在生物体内含硫氨基酸的代谢中发挥重要作用，以催化同型半胱氨酸分解为Of．．丁酮酸，硫化氢和氨，分解产物 并被开发成为新型抗肿瘤药物及同型半胱氨酸血症的诊断试 硫化氢与适当显色剂作用，然后利用分光光度法检测即可计算 剂，其作用机制及在治疗上的潜在应用价值引起了人们的极大 关注。另外它在原虫体内含硫氨基酸的代谢中发挥重要作用， 建立了