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第2节 基因工程的基本操作程序 【学习目标】 简述基因工程原理及基本操作程序 【学习重点】基因工程基本操作程序的四个步骤 【学习难点】（1）从基因文库中获取目的基因（2）利用PCR技术扩增目的基因 【自主学习】 一、目的基因的获取： 1．目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的 。 2．获取目的基因的方法 (1)从基因文库中获取目的基因 ①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 ，导人受体菌的群体中 ，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因组文库：含有一种生物的 基因 ②种类 cDNA文库：含有一种生物的 基因 ③目的基因的获取 根据基因的有关信息：基因的 序列、基因在 上的位置、基因的 产物mRNA、基因的 产物蛋白质等特性获取目的基因。 (2)利用PCR技术扩增目的基因。 ①PCR：是一项在生物体外 特定DNA片段的核酸合成技术。 ②条件：已知目的基因的 序列。 ③过程：目的基因DNA受热形成 ，与 结合，然后在 ______的作用下进行延伸形成DNA。 ④方式：指数扩增=2n(n为扩增循环的次数) (3)人工合成法：基因较小，核苷酸序列已知，可以人工合成。 二、基因表达载体的构建 1．表达载体的组成：目的基因+ + +标记基因等。 2．启动子：位于基因的 ，它是 结合 的部位，驱动基因转录产生mRNA。 3．终止子：位于基因的 ，终止 。 4．表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且 给下一代；使目的基因 ____ 和发挥作用。 5．标记基因： 受体细胞是否含有目的基因。 6．不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。 三、将目的基因导入受体细胞 (一)转化：目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和 的过程。 (二)方法 1．将目的基因导入植物细胞 (1)农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染 植物和裸子植物，对___________植物没有感染力；Ti质粒的 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。 ②转化：目的基因插人 农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。 (2)基因枪法 基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 (3)花粉管通道法 花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法。（我的的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的） 2．将目的基因导入动物细胞 (1)方法： 注射技术。 (2)操作程序：目的基因表达载体 →取卵(受精卵) →显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到____性动物的 _________________________内发育→新性状动物。 3．将目的基因导人微生物细胞 (1)原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 (2)转化： 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→ _________ 细胞吸收DNA分子。 四、目的基因的检测与鉴定 1．检测 (1)方法：标记了的 、抗原抗体杂交。 (2)内容 ①检测转基因生物染色体的DNA是否插入 。 ②检测目的基因是否转录 。 ③检测目的基因是否翻译成 。 2．鉴定： 鉴定、抗病鉴定等。 【自主小结】：一、目的基因的获取 二、基因表达载体的构建 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 【学法指导】 ［例1］下列有关基因工程技术的正确叙述是 A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体 B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快 D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达 ［例2］应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到探测疾病的目的。基因探针是指 A．用于检测疾病的医疗器械 B．用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子 C．合成β—球蛋白的DNA D．合成苯丙羟化酶DNA片段 【基础训练】 1、构建基因组DNA文库时，首先雷分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA?? C、总mRNA?? D、tRNA?? 2．在基因工程中，科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是（ ） A.结构简单，操作方便 B.遗传物质含量少 C. 繁殖速度快 D.性状稳定，变异少 3．因工程的