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人支气管上皮细胞恶性转化系统替代动物长期致癌试验的基础研究 袁素波廖明阳周吉吉陈光宇 军事医学科学院毒物药物研究所 以体外试验方法替代动物体内试验进行新药及各种健康 生长期拟合直线方程的斜率分别为：BEAS-2B／3．6476、 相关产品的安全性评价可以减少动物用量，降低实验成本， 提高检测效能。用于确认化学物质致癌性的长期动物致癌试验 因需数百只啮齿类动物终身染毒和观察而成为安全性评价实 验中成本最高、耗时最长的困难试验， 亟需研究寻找有效的 倍增时间为22 5h， BEAS—ZTa，b，C3株细胞均在35小时 体外试验替代方法。80％的人类肿瘤都是起源于上皮细胞的癌 以上，明显长于BEAS一2B细胞。此结果提示恶性程度较高， 症，本研究设想用人支气管卜皮细胞恶性转化系统替代长期 致瘤性较强的细胞，其倍增时间较长，生长速度较慢。此与 动物致癌试验来检测化学物质的致癌性。研究以国际癌症研 致。 究署(IARC)确认的药物致癌原塞替派(Thiotepa、TE)处理 izedhumanbronchial 永生化人支气管上皮细胞(Immortal 转化细胞在软琼脂介质中集落形成率的高低是其恶性程 ialcel epithellS，BEAS-2B)诱导其恶性转化，以转化细胞度高低的蕈要标志。BEAS—TTa，b软琼脂集落形成率显著高于 在裸鼠体内成瘤为致癌性检出的标志并伴随研究了恶性转化 过程涉及的相关机制。 1塞替派诱导人支气管上皮细胞发生转化及转化细胞的 密和紧柬，空间立体感更强。说明转化细胞在裸鼠体内的成 增殖动力学特征 瘤过程中其三维空间生长能力得到了进一步的加强。 1 一1 、CFE13 1％ BEAS一2B细胞经TE 5mg．L 的剂量染毒处理后的细胞命名为BEAS-TE细胞，细胞发生转化 后生长速度慢于、生长密度低于对照细胞。BEAS一2B处于细胞染色体众数相对稳定，传代过程中近二倍体细胞比例始终维持 周期各期的细胞比例基本稳定，BEAS—TE细胞随着细胞转化在85％左右。说明多倍体肿瘤细胞较二倍体的具有更强的恶性 代龄的延伸而}Jj现GO／G1期细胞比值急骤下降，S期细胞比例 上升的现象；第10、23代BEAS-TE细胞软琼脂集落形成率分 +M1，+M 别高于同代龄BEAS-2B细胞10、100倍。转化细胞独特的增 殖动力学特征和湿著增高的软琼脂集落形成率说明细胞已完 成癌前转化并具有较高的转化程度。 BEAS一竹s细胞的持续性丢失是细胞转化到成瘤过程的重要的 2转化细胞的染色体非随机性改变 染色体畸变事件。 BEAS一2B为近二倍体细胞，核型稳定。BEAS—TE细胞在传实验成功地运用塞替派诱发人支气管上皮细胞恶性转化 代过程中渐趋多倍体，至25代时，4倍体及以上倍体细胞比 实验在体外条件F模拟了体内受致癌原作用后的靶细胞向肿 例上升达86％，软琼脂集落细胞(BEAS—STE)多倍体细胞达100％。瘤细胞的演变过程，在细胞水平获得了典型的细胞恶性转化表 型，在裸鼠体内证实了转化细胞的恶性致瘤性，在瘤细胞株 BEAS一2B细胞5、15、22号染色体均丢失1条，为单体型。相 应形成M1、M2、M33个标志染色体，维持较为稳定的近二 上观察到了恶性肿瘤细胞的典型牛物学特征，在致痛机理的 不同层次上证实了人支气管上皮细胞恶性转化系统可以有效 倍体核型：46，XY，一5，一15，一22。+M1，+M2，+M3。BEAS—TE少数细 胞有14号染色体的丢失。BEAS—STE在BEAS—TE的核型基础上地检出受试物的致癌性，可以作为替代长期动物致癌试验的 出现了高达34％的非稳定性畸变，其中双着丝粒19％，并有2备选方法。 对形状怪异的巨型三着丝粒染色体。以