BAG1在喉鳞癌组织中表达及其与p53基因和细胞凋亡的相关性论文.docVIP

　　BAG1在喉鳞癌组织中表达及其与p53基因和细胞凋亡的相关性论文 吴曙辉, 江孝清, 周绪红, 尹述成 【摘要】 目的 最近研究发现在恶性肿瘤细胞中存在BAG1蛋白表达水平和活性异常升高。本研究探讨在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell caicinomas, LSCC)中BAG1表达临床意义及其与p53、细胞凋亡的关系,以了解BAG1与喉癌发生发展及预后的关系。方法 运用免疫组化技术及TUNEL法检测68例LSCC组织及30例癌旁组织中BAG1、p53蛋白的表达及癌细胞凋亡指数(apoptosis index, AI)，并应用计算机图像分析系统对其阳性表达进行定量分析。结果 BAG1在LSCC及癌旁组织中的阳性率分别为76.5%、16.7%, BAG1蛋白在LSCC组织的表达较癌旁组织中的表达高(Ｐ 0.05)，5年生存者BAG1蛋白表达阳性率显著低于5年死亡者（Ｐ 0.05），且细胞核BAG1阳性者较细胞浆阳性者预后更差(Ｐ 0.05)；BAG1蛋白阳性组及BAG1蛋白阴性组的p53蛋白阳性率差异无显著性(Ｐ 0.05);BAG1阳性患者的AI均数显著低于阴性患者（Ｐ 0.01）, 且表达呈负相关(r=-0.602)。结论 BAG1可能在LSCC的细胞凋亡及肿瘤发生中起着重要作用,并对LSCC的早期诊断，预后判断有着重要的意义。 【关键词】 喉肿瘤；鳞状细胞癌；预后；BAG1；p53；免疫组化;凋亡 Expression of BAG1 in Laryngeal Squamous Cell Carcinoma and Its Relationship s; Squamous cell carcinoma; Prognosis; BAG1; p53; Immunohistochemistry; Apoptosis 细胞凋亡(Apoptosis)是在特定环境条件下普遍存在的生理过程,许多研究结果显示细胞凋亡是由一些基因所调控,包括凋亡诱导剂(p53、bad、bax、bak、bclXs和bik)和凋亡抑制剂(BAG1、 bcl2、bclXl和mcl2 )1。目前已经确定的是,细胞凋亡诱导剂p53在人类许多恶性肿瘤中检测到缺失或突变。相反地,.freelous cell caicinomas, LSCC)组织中BAG1的表达情况,并观察它与p53,细胞凋亡指数(apoptosis index, AI)的关系,以探讨 BAG1在喉癌中的表达及其与p53,细胞凋亡的关系。 1 资料与方法 1.1 标本来源与临床资料 选用武汉大学中南医院1995年1月～2000年12月期间经手术切除的喉鳞癌石蜡标本68例,对应喉癌旁组织标本30例。68例喉癌患者年龄37～78岁，中位年龄56岁。其中男性59例，女性9例。肿瘤病理分级:高分化(G1)27例,中分化(G2)17例,低分化(G3)24例。根据1997年UICC标准进行TNM临床分期:Ⅰ～Ⅱ期32例,Ⅲ～Ⅳ期36例。19例伴术前颈淋巴结转移,49例无转移。所有病例术前均未作放疗或化疗,随访时间39～74个月, 68例中生存期超过5年的有25例,5年以内38例,失访5例.freel处取材，均避开溃疡及坏死区。所有标本均经病理检查证实,喉癌旁组织标本经病理检查确认无癌细胞。标本取材后一式两份, 一份置-70℃低温冰箱编号保存备用，一份送病检，经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片。 1.2 免疫组织化学染色检测BAG1、p53的蛋白表达 采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶法(streptavidin peroxidme, SP), 二氨基联苯胺(diamionben zidene DAB)显色。BAG1多克隆抗体购自武汉博士德公司，p53 单克隆抗体 (DO1)购自美国Santa Cruz公司，SP超敏试剂盒购自福建迈新生物技术开发公司。操作步骤参照说明书进行，微波抗原修复。用已知阳性组织标本作阳性对照, 以磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)代替第一抗体作为阴性对照,所有切片采用一批试剂完成。 1.3 细胞凋亡 采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TDTmediatedDUTP nick end Labeling technique, TUNEL),操作步骤严格按说明书进行。标记液及抗体购自武汉博士德生物公司，每批染色均设有阳性和阴性对照。 1.4 结果判定及计算机图像分析 采用同济干屏影像工程公司HPIAS 2000型彩色多媒体图像分析软件。BAG1细胞浆细胞核棕黄色染色为阳性。p53细胞核棕黄色染色为阳性,凋亡阳性细胞